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1、吡咯喹啉醌對(duì)雪旺細(xì)胞增殖及NF-κB表達(dá)的影響【摘要】［目的］觀察吡咯喹啉醌對(duì)雪旺細(xì)胞的增殖作用及其對(duì)體外培養(yǎng)雪旺細(xì)胞NF-κB表達(dá)的影響。［方法］新生鼠雪旺細(xì)胞體外原代培養(yǎng)及純化，S-100免疫熒光標(biāo)記鑒定雪旺細(xì)胞，設(shè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組吡咯喹啉醌的濃度為100nmol／L；加藥72h后提取總mRNA及總蛋白進(jìn)行RT-PCR和Westernblot分析。［結(jié)果］采用RT-PCR和Westernblot檢測(cè)NF-κB的表達(dá)，結(jié)果均表明實(shí)驗(yàn)組表達(dá)較對(duì)照組高(P<0.05)。［結(jié)論］吡咯喹啉醌可促進(jìn)雪旺細(xì)胞增殖，NF-κB上調(diào)在
2、吡咯喹啉醌促雪旺細(xì)胞增殖中起作用。【關(guān)鍵詞】吡咯喹啉醌 雪旺細(xì)胞 增殖 NF-κB Abstract:［Objective］Toinvestigatetheeffectsofpyrroloquinolinequinine(PQQ)onproliferationandexpressionofNF-κBofSchwanncells.［Methods］SchwanncellswereculturedfromsciaticnervesofSDratsinvitro.TheSchwanncellswereidentifiedandpurif
3、iedbyimmunofluorescenceofS-100andAra-C.Experimentalgroupwithwas100nmol/LofPQQandcontrolgroupweresetup.TheexpressionofNF-κBinSchwanncellswasdeterminedbyRT-PCRandWesternblotting.［Results］TheexpressionofNF-κBwereup-ragulatedbyPQQin11culturedSchwanncells(P<0.05).［Conclu
4、sion］PQQcouldpromotetheproliferationofSchwanncellsandup-regulationofNF-rd3playanimportantroleinthisprocess. Keywords：pyrroloquinolinequinone;Schwanncell;proliferation;NF-κB 雪旺細(xì)胞(schwanncells，SCs)是周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)的主要膠質(zhì)細(xì)胞，在周?chē)窠?jīng)損傷、再生和修復(fù)過(guò)程中發(fā)揮重要作用［1］。目前神經(jīng)再生工程研究飛速發(fā)展，SCs作為該領(lǐng)域的種子細(xì)胞日益為研
5、究者所重視［2、3］。SCs體外增殖速度緩慢，體外短時(shí)間內(nèi)擴(kuò)增大量高純度SCs是神經(jīng)再生組織工程領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。吡咯喹啉醌(pyrroloquinolinequinone，PQQ)是一種不依賴(lài)于NAD(P)和FAD的葡萄糖脫氫酶輔基，在生物體內(nèi)可發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng)，能促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育，細(xì)胞的增殖，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞并促進(jìn)其神經(jīng)生長(zhǎng)因子的分泌［4］。先前已有學(xué)者將PQQ作用于損傷的周?chē)窠?jīng)，發(fā)現(xiàn)它可以促進(jìn)周?chē)窠?jīng)修復(fù)及再生［5～7］；而且發(fā)現(xiàn)PQQ可以促進(jìn)SCs分泌生長(zhǎng)因子［8、9］；得到了PQQ促進(jìn)體外培養(yǎng)SCs增殖的最佳作用濃度和最佳
6、作用時(shí)間［10］。本實(shí)驗(yàn)旨在研究PQQ促進(jìn)體外培養(yǎng)SCs的增殖并觀察其對(duì)體外培養(yǎng)SCs的NF-κB表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討PQQ促進(jìn)SCs增殖效應(yīng)并揭示其可能的機(jī)制。11 1材料與方法 1.1材料 出生3～5dSD大鼠20只(武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)：DMEM／F12培養(yǎng)基、胎牛血清(Gibco公司)；6孔板(Corning公司)；胰蛋白酶、Ⅱ型膠原酶(Sigma公司)；Trizol、PCR引物(Invitrogen公司)；RT-PCR試劑盒(Fermentas公司)；蛋白裂解液(碧云天公司)；BCA蛋白定量試劑盒(北京普利
7、萊公司)；兔抗NF-κB一抗、羊抗兔二抗(SantaCruz公司)?！ ?.2雪旺細(xì)胞體外培養(yǎng)及純化 取3～5dSD大鼠，顯微鏡下無(wú)菌剝離雙側(cè)坐骨神經(jīng)；D-Hanks液漂洗后移入混合酶(含0.25%胰蛋白酶和0.03%Ⅱ型膠原酶)中，于37℃空氣搖床中消化40min；1000r/min離心10min，棄上清后加入5ml培養(yǎng)液(含10%胎牛血清)，將細(xì)胞懸液移入培養(yǎng)瓶中，置于37℃，含5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；30min后行差速貼壁去除成纖維細(xì)胞，于次日加入阿糖胞苷(Ara-C，10-5mmol／L)繼續(xù)殺滅成纖維細(xì)胞，換液繼續(xù)培養(yǎng)?！?/p>
8、 1.3S-100免疫熒光鑒定雪旺細(xì)胞11 將培養(yǎng)的細(xì)胞PBS洗滌3次×5min；4℃、4%多聚甲醛固定10min，PBS洗滌3次×5min；加1%triton-100，37℃孵育20min，PBS洗滌1次×5min，正常羊血清封閉5
