原藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證

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1、藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法建立1．儀器與材料UV－1601紫外－可見分光光度計(jì)(日本島津)AB204-N電子天平(萬分之一天平，METTLERTOLEDO)BP211D電子天平（十萬分之一天平，Sarlorius）葡萄糖(分析純，天津市化學(xué)試劑一廠)苯酚(分析純，天津市化學(xué)試劑一廠)蒽酮分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）硫酸(分析純，天津市凱信化學(xué)試劑有限公司)當(dāng)歸藥材購于甘肅岷縣，經(jīng)天津藥物研究院中藥現(xiàn)代研究部張鐵軍研究員鑒定為傘形科植物當(dāng)歸Angelicasinensis(Oliv)Diels的干燥根，經(jīng)檢測符合《中華人民共和國藥典》（2010版）一部的有關(guān)規(guī)定。黃芪藥材

2、購于甘肅岷縣，經(jīng)天津藥物研究院中藥現(xiàn)代研究部張鐵軍研究員鑒定為蒙古黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch)Bge．Var．mongholicus(Bge.)Hsiao的干燥根，經(jīng)檢測符合《中華人民共和國藥典》（2010版）一部的有關(guān)規(guī)定。2．方法與結(jié)果2.1藥材中多糖含量測定方法本試驗(yàn)采用比色法對藥材中的多糖含量進(jìn)行測定，并建立了含量測定方法。2.1.1對照品溶液的制備精密稱取105℃干燥至恒重的無水葡萄糖對照品30.43mg，置100ml量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中含無水葡萄糖0.3043mg）。2.1.25％苯酚

3、試劑的配制取苯酚100g，加鋁片0.1g和碳酸氫鈉0.05g，蒸餾，收集182℃餾分，稱取此餾分5g置棕色容量瓶中溶解后定容，存冰箱備用。2.1.3供試品溶液制備方法的考察與確定水提時(shí)間的考察分別取60℃干燥至恒重的當(dāng)歸及黃芪藥材細(xì)粉5份，每份約0.50g，精密稱定，置索氏提取器中，用80%乙醇回流提取2小時(shí)，殘?jiān)鼡]干溶劑后，再繼續(xù)以水分別回流提取1.0h、2.0h、3.0h、4.0h、5.0h，反復(fù)洗至250ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml具塞干燥試管中，采用改良后的苯酚-硫酸法測定吸光度，計(jì)算含量，結(jié)果見表1-1。表1-1水提不同提取時(shí)間

4、對當(dāng)歸含量測定的影響結(jié)果樣品提取時(shí)間（h）當(dāng)歸多糖含量（%）黃芪多糖含量（%）11.07.5685.50122.08.5996.51133.08.5836.60044.08.5946.58955.08.5806.590從表1-1可知，水提提取時(shí)間為2.0h時(shí)，藥材含量達(dá)到最大值且保持恒定，延長提取時(shí)間藥材含量變化不大，故選擇提取時(shí)間為2.0h。2.1.4供試品溶液的制備分別取60℃干燥至恒重的當(dāng)歸及黃芪藥材細(xì)粉約0.5g，精密稱定，置索氏提取器中，用80%乙醇回流提取1小時(shí)，殘?jiān)鼡]干溶劑后，再繼續(xù)以水回流提取2小時(shí)，反復(fù)洗滌殘?jiān)盁恐?50ml量瓶中，定容至刻度，

5、搖勻，備用。2.1.5最大吸收波長選擇取2.1.1項(xiàng)下對照品溶液，在200nm-700nm波長間進(jìn)行紫外吸收光譜掃描，最大吸收波長為490nm，確定選擇490nm作為檢測波長。2.1.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液1.0ml，2.0ml，3.0ml，4.0ml，5.0ml，6.0ml，分別置50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取上述各溶液1ml，置具塞試管中，分別加5％苯酚溶液0.6ml，混勻，迅速加入硫酸3.0ml，搖勻，于90℃水浴中15分鐘，取出，置冰水浴中15分鐘，取出，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外－可見分光光度法（附錄VA），在490nm的波長處測定吸

6、光度，結(jié)果見表1-2。以吸光度為縱坐標(biāo)，葡萄糖取樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，可得回歸方程：y=0.0045x-0.0011，r=0.9995(n=6)。葡萄糖在24.24～145.44μg范圍內(nèi)，與吸光度呈良好的線性關(guān)系，結(jié)果見圖1-1。表1-2葡萄糖線性范圍考察取樣量(μg)吸光度24.240.11548.480.20972.720.33096.960.433121.200.554145.440.655圖1-1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig1-1StandardCurveofglucose2.1.6精密度試驗(yàn)精密量取同一供試品溶液，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法操作測吸光度，重復(fù)測定6

7、次，求得吸光度值的RSD值為0.33%。結(jié)果見表1-3，說明儀器的精密度符合要求。表1-3精密度試驗(yàn)結(jié)果測定次數(shù)吸光度A10.38720.38630.38940.38850.38660.386RSD（%）0.332.1.7穩(wěn)定性試驗(yàn)精密量取同一供試品溶液，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法操作，每10分鐘測定一次吸光度，到1小時(shí)后改為30分鐘測一次，求得多糖含量的RSD值為1.02％，結(jié)果見表1-4，測定值在120分鐘內(nèi)保持穩(wěn)定。以下吸光度的測定均在120分鐘內(nèi)完成。表1-4穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果測定時(shí)間(min)多糖含量（％）08.491108.380208.602308.44740