hplc常見故障排除

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1、注意：在對(duì)NH2改性的色譜柱進(jìn)行再生時(shí)，由于NH2可能成銨根離子的形式存在，因此應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。**如果簡(jiǎn)單的有機(jī)溶劑/水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。色譜柱的維護(hù)1．使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度）2．大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2－7.5，盡量不超過該色譜柱的pH范圍3．避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化4．流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理5．如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢柱子沖洗干凈，并保存大乙腈中6．壓力升高是需要更

2、換預(yù)柱的信號(hào)HPLC六通閥進(jìn)樣器的使用及保養(yǎng)六通閥進(jìn)樣器是高效液相色譜系統(tǒng)中最理想的進(jìn)樣器，它是由圓形密封墊(轉(zhuǎn)子)和固定底座(定子)組成。美國(guó)Rheodyne公司的六通閥進(jìn)樣器最為通用，各大HPLC儀器制造商均以此產(chǎn)品作為儀器的進(jìn)樣器。工作原理：1、手柄位進(jìn)樣(Load)位置時(shí)，樣品經(jīng)微量進(jìn)樣針從進(jìn)樣孔注射進(jìn)定量環(huán)，定量環(huán)充滿后，多余樣品從放空孔排出；2、將手柄轉(zhuǎn)動(dòng)至進(jìn)樣(Inject)位置時(shí)，閥與液相流路接通，由泵輸送的流動(dòng)相沖洗定量環(huán)，推動(dòng)樣品進(jìn)入液相分析柱進(jìn)行分析。雖然六通閥進(jìn)樣器具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、使用方便、壽命長(zhǎng)、日常無需維修等特點(diǎn)，但正確的使用和維護(hù)將能增加使用壽

3、命，保護(hù)周邊設(shè)備，同時(shí)增加分析準(zhǔn)確度。如使用得當(dāng)?shù)脑?，六通閥進(jìn)樣器一般可連續(xù)進(jìn)樣3萬次而無需維修。以下淺談?dòng)嘘P(guān)六通閥進(jìn)樣器的使用及保養(yǎng)事宜(僅供參考)：1、手柄處于Load和Inject之間時(shí)，由于暫時(shí)堵住了流路，流路中壓力驟增，再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位，過高的壓力在柱頭上引起損壞，所以應(yīng)盡快轉(zhuǎn)動(dòng)閥，不能停留在中途。在HPLC系統(tǒng)中使用的注射器針頭有別于氣相色譜，是平頭注射器。一方面，針頭外側(cè)緊貼進(jìn)樣器密封管內(nèi)側(cè)，密封性能好，不漏液，不引入空氣；另一方面，也防止了針頭刺壞密封組件及定子。2、六通閥進(jìn)樣器的進(jìn)樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。使用部分裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量最多為定量環(huán)體

4、積的75％，如20gL的定量環(huán)最多進(jìn)樣15p,L的樣品，并且要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同；使用完全裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量最少為定量環(huán)體積的3至5倍，即20gL的定量環(huán)最少進(jìn)樣60至1001aL的樣品，這樣才能完全置換樣品定量環(huán)內(nèi)殘留的溶液，達(dá)到所要求的精密度及重現(xiàn)性。推薦采用100ul的平頭進(jìn)樣針配合20ul滿環(huán)進(jìn)樣。3、可根據(jù)進(jìn)樣體積的需要自已制作定量環(huán)，一般不要求精確計(jì)算定量環(huán)的體積，譬如，一根名義上10gL的定量環(huán)，實(shí)際是9gL還是1lgL并不重要，因?yàn)楸粶y(cè)樣品和校正樣品的進(jìn)樣體積保持一致，在計(jì)算結(jié)果時(shí)誤差都被抵消了。4、進(jìn)樣樣品要求無微粒和能阻死針頭及進(jìn)樣閥的物質(zhì)，樣

5、品溶液均要用0．45~tm的濾膜過濾。防止微粒阻塞進(jìn)樣閥和減少對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。為防止緩沖鹽和其它殘留物質(zhì)留在進(jìn)樣系統(tǒng)中，每次結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣器，通常用不含鹽的稀釋劑、水或不含鹽的流動(dòng)相沖洗，在進(jìn)樣閥的Load和Inject位置反復(fù)沖洗，再用無纖維紙擦凈注射器針頭的外側(cè)。液相色譜儀色譜柱使用及維護(hù)　　每天用足夠的時(shí)間來平衡色譜柱，您就會(huì)在處理問題方面獲得最大的"補(bǔ)償"，而且您的色譜柱的壽命也會(huì)變得更長(zhǎng)！------一定得做！　　新的色譜柱在使用之前應(yīng)該在您自己的液相色譜儀上進(jìn)行性能測(cè)試，即使用色譜柱附帶的檢驗(yàn)報(bào)告上測(cè)試條件和樣品來測(cè)定該色譜柱的柱效。并且，在以后的使用中，應(yīng)

6、時(shí)常對(duì)色譜柱進(jìn)行測(cè)試?？ㄌ字陌惭b（不加預(yù)柱）1．將卡套架套入柱芯2．將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夾套（見左圖）3．將已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高過夾套片4．將卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手?jǐn)Q緊5．然后依同樣的順序連接好柱子的另一端6．連接到液相色譜儀，PEEK接頭手?jǐn)Q即可；若為不銹鋼接頭應(yīng)使用專用扳手注意：使用卡套柱時(shí)，兩端的卡套應(yīng)時(shí)刻連接在柱芯上。不管您是平衡色譜柱或是清洗，任何時(shí)候都不能將卡套取下來，否則會(huì)造成填料的流失。卡套柱的安裝（加預(yù)柱）1．將卡套架套入柱芯2．將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽，使夾套高于柱芯（見左圖）3．將已套到柱芯上的卡套架向上

7、推，直至高過夾套片4．將"子彈頭"預(yù)柱放入卡套片內(nèi)5．將卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手?jǐn)Q緊6．然后依同樣的順序連接好柱子的另一端7．連接到液相色譜儀，PEEK接頭手?jǐn)Q即可；若為不銹鋼接頭應(yīng)使用專用扳手更換色譜柱濾網(wǎng)和玻璃棉過濾片（同時(shí)可以修補(bǔ)色譜柱）注意：在取出反相柱芯的濾網(wǎng)和玻璃片之前，應(yīng)該將色譜柱充分用水和甲醇/乙腈沖洗，而且修補(bǔ)工具的頭部也應(yīng)該蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出濾網(wǎng)和玻璃棉濾片時(shí)帶出柱子內(nèi)的填料。1．將修補(bǔ)工具中的2套入柱芯的頂端2．將修補(bǔ)工具中的3輕輕地旋入已套著2的柱芯中，并順時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)到旋緊3．