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《SNT1390-2004-香蕉細菌性枯萎病菌檢疫鑒定方法.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、SN中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準SN/T1390-2004香蕉細菌性枯萎病菌檢疫鑒定方法MethodsforquarantineandidentificationofRalstoniasolanacearum(Smith)Yabuuchietalrace22004-06-01發(fā)布2004-12-01實施中華人民共和國發(fā)布國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局SN/T1390-2004月叨呂本標準的附錄A、附錄B和附錄C為資料性附錄。本標準由國家認證認可監(jiān)督管理委員會提出并歸口。本標準起草單位:中華人民共和國
2、廣州出人境檢驗檢疫局。本標準主要起草人:張傳飛、鐘國強、趙立榮、司徒保祿.本標準系首次發(fā)布的出人境檢驗檢疫行業(yè)標準。SN/T1390-2004香蕉細菌性枯萎病菌檢疫鑒定方法1范圍本標準規(guī)定了進出境植物檢疫中香蕉細菌性枯萎病菌檢疫鑒定方法。本標準適用于香蕉、大蕉、蝎尾蕉等寄主植物之果實、吸芽、試管苗和其他繁殖材料的香蕉細菌性枯萎病菌檢疫鑒定。2規(guī)茫性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款二凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵
3、根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GS/丁4789.28-1994食品衛(wèi)牛微生物學(xué)檢驗染色法、培養(yǎng)基和試劑3原理香蕉細菌性枯萎病菌的分類地位學(xué)名Ralstuniasulanacearum(Smith)`iabuuchietalrace2異名Pseudomonassolanacea，二二E.F.Smithrace2,病害英文名Mokodiseaseofbanana或者Aacteriaiwiltofbanana。該病菌隸屬于原核生物界
4、Procaryotes，薄壁細菌門Gracilicutes,Ralstoniacea?？?，尺alstonia屬。香蕉細菌性枯萎病菌在寄主范圍、癥狀特點、培養(yǎng)性狀及生物學(xué)特性等方面，不同于近似種，也不同于青枯菌的其他生理小種或生物型，是該病菌的鑒定依據(jù)(參見附錄八、附錄B),4儀器和試劑41儀器、器具4.1.1生物顯微鏡。4，2體視顯微鏡。413超凈工作臺。414生物培養(yǎng)箱。415高壓滅菌器。4，1.6恒溫干燥箱。4，.7電冰箱。4.1.8普通天平(感量0.01g),4.1.9試管(15mmX130mm
5、)。4.1卜10小件用器具;培養(yǎng)皿、酒精燈、試管、載玻片、蓋玻片、接種針、接種環(huán)、移液器、白瓷盤、燒杯、記號筆、小剪刀、鑷子、刀片等。42試荊4.2.1TTC培養(yǎng)基(參見附錄C)o4.2.295%乙醇(C2H,0)。4,2.3次氯酸鈉溶液(NaC10)e42，4無菌水。aSN/T1390-20045實驗室檢驗5.1癥狀檢查首先應(yīng)看植株是否萎蔫，檢查植株的根莖葉果等各個部位，葉片是否變黃、折掛，果實是否質(zhì)地變硬、顏色變褐、干腐。如果發(fā)現(xiàn)上述任何一種癥狀，應(yīng)及時用解剖刀橫向剖開病株假莖基部，檢查其維管束組
6、織是否變褐色、病部受擠壓后是否有菌膿溢出，如果是則應(yīng)進一步分離純化菌種。本病癥狀易與香蕉巴拿馬萎蔫病(Fusariumoxysporiumf.sp.cubensis)混淆，但前者通常是植株上部的三片幼葉先褪綠黃化，而后者往往是下部老葉先發(fā)病、病部無菌膿、為害不產(chǎn)生褐色干腐的病果.5.2細菌的分離純化5.2.1分離:采用選擇性TTC培養(yǎng)基，用平板劃線法或稀釋分離法分離細菌。將病組織切成3mm見方的小塊，先用70%乙醇浸泡30s，撈出后用0.3%次氯酸鈉溶液處理5min，再用無菌水清洗兩次，最后把病組織置
7、放在潔凈的載玻片上搗碎，靜置20s，用接種環(huán)蘸取汁液在TTC平板上劃線，350C-370C下培養(yǎng)2d--4d后，檢查并篩選培養(yǎng)基上的菌落。青枯菌在TTC上特征:無致病力或致病力很弱的菌落為深紅色，致病性菌落為流質(zhì)狀、白色或中央帶淡紅的白色。5.2.2菌種純化:采用平板劃線法，即用滅菌的移種針針頭蘸取TTC上可疑的致病性菌落后，在TTC平板上多次劃線純化，在350C-370C溫度下培養(yǎng)2d-4d，移出單個菌落后進一步擴大繁殖。5.3革蘭氏染色反應(yīng)(可省略本步驟)革蘭氏陰性反應(yīng)，按GB/T4789.28-
8、1994中的2.2進行實驗5，4致病性測試5.4.1測試植物測試植物除香蕉外，還應(yīng)在馬鈴薯、番茄、煙草、茄子、姜五種植物中任選兩種。香蕉枯萎病菌屬于2號小種，寄生專化性強，只為害香蕉不為害其他測試植物。5.4.2接種方法接種采用針刺加注射的方法，用消毒的挑針蘸上菌齡為24h、濃度為10'cfu/mL的細菌懸浮液后，針刺植株的上部幼葉或(假)莖基部。注射法采用注射器在每株植物的莖基部注射10mL左右的接種液，接種濃度10'cfu/mL。陰性對照用無菌水代替
