結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室生物安全及菌株運(yùn)輸

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1、結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室生物安全及菌株運(yùn)輸內(nèi)容一、結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室生物安全二、結(jié)核菌株或樣本運(yùn)輸三、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估一、結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室生物安全結(jié)核桿菌的生物學(xué)性狀1、結(jié)核桿菌為細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲的桿菌，約1-4×0.3-0.6μm，常聚集成團(tuán)，牛型比人型略粗短；2、分枝桿菌屬的細(xì)菌細(xì)胞壁脂質(zhì)含量較高，約占干重的60%，特別是其中的大量分枝菌酸可影響染料的穿入；3、一般用萋-尼（ZiehlNeelsen）抗酸性染色法，以5%石炭酸復(fù)紅加溫染色后可以染上，但著色后不易被鹽酸酒精脫色；結(jié)核桿菌的生物學(xué)性狀4、若再加用美藍(lán)復(fù)染，則分枝桿菌呈紅色，而其它細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為藍(lán)色；5、專性需氧，最適溫度為37℃，低于30℃或高于42

2、℃均不生長(zhǎng)；營(yíng)養(yǎng)要求較高，生長(zhǎng)緩慢，初次分離需要營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基。常用的有Lowenstein-Jensen培養(yǎng)基，內(nèi)含蛋黃、甘油、無(wú)機(jī)鹽和孔雀綠等。6、細(xì)胞壁的脂質(zhì)含量較高，影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收，故生長(zhǎng)緩慢，在一般培養(yǎng)基中每分裂一代需要10多個(gè)小時(shí)，在人體內(nèi)需24-36小時(shí)；結(jié)核桿菌的生物學(xué)性狀7、一般10-30天可見(jiàn)菌落生長(zhǎng)，菌落呈顆粒、結(jié)節(jié)或花菜狀，乳白色或米黃色，不透明；8、結(jié)核桿菌細(xì)胞壁中含有大量脂質(zhì)，可防止菌體水分的丟失，故對(duì)干燥的抵抗力特別強(qiáng)，沾附在塵埃上保持傳染性8-10天，在干燥痰內(nèi)可存活6-8個(gè)月；9、結(jié)核桿菌對(duì)濕熱敏感，在液體中加熱62-63℃后15分鐘或煮沸即被殺死；結(jié)

3、核桿菌的生物學(xué)性狀10、結(jié)核桿菌對(duì)紫外線敏感，直接日光照射數(shù)小時(shí)可被殺死，可用于結(jié)核患者衣服、書籍等的消毒；11、結(jié)核桿菌的抵抗力與環(huán)境中有機(jī)物的存在有密切關(guān)系，如痰液可增強(qiáng)結(jié)核桿菌的抵抗力，因大多數(shù)消毒劑可使痰中的蛋白質(zhì)凝固，包在細(xì)菌周圍，使細(xì)菌不易被殺死；12、5%的石炭酸在無(wú)痰時(shí)30分鐘可殺死結(jié)核桿菌，有痰時(shí)需要24小時(shí)；5%的來(lái)蘇兒無(wú)痰時(shí)5分鐘殺死結(jié)核桿菌，有痰時(shí)需要1-2小時(shí)；結(jié)核桿菌的生物學(xué)性狀13、結(jié)核桿菌對(duì)酸（3%HCL）或堿（4%NaOH）有抵抗力，15分鐘不受影響，可在分離培養(yǎng)時(shí)用于處理有雜菌污染的標(biāo)本和消化標(biāo)本中的粘稠物質(zhì)；14、結(jié)核桿菌對(duì)1：75000結(jié)晶紫或1：1

4、3000孔雀綠有抵抗力，加在培養(yǎng)基中可抑制雜菌生長(zhǎng)；15、結(jié)核桿菌對(duì)鏈霉素、異煙肼、利福平、環(huán)絲氨酸、乙胺丁醇、卡拉霉素、對(duì)氨水楊酸等敏感，但長(zhǎng)期用藥容易出現(xiàn)耐藥性，而吡嗪酰胺的耐藥性<5%。實(shí)驗(yàn)室安全操作—原則1、實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按等級(jí)要求完善實(shí)驗(yàn)設(shè)施，如生物安全柜的抽風(fēng)排風(fēng)功能、紫外燈消毒、生物安全柜內(nèi)的除菌濾膜定期更換等；2、普通實(shí)驗(yàn)室應(yīng)注意氣流方向，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中盡量避免強(qiáng)氣流變化而產(chǎn)生氣溶膠（如：人員走動(dòng)等）；3、易產(chǎn)生氣溶膠或出現(xiàn)濺出的操作,如涂片、離心或其它操作，應(yīng)在BSL-2實(shí)驗(yàn)室的Ⅱ級(jí)生物安全柜中進(jìn)行，并使用個(gè)體防護(hù)設(shè)備；4、盡可能減少使用注射器針頭，實(shí)驗(yàn)中使用注射器時(shí)，用過(guò)的針頭切

5、勿再重新入套或拔開(kāi)注射器與針頭，應(yīng)直接放入銳氣收集器，以免劃破皮膚造成接種感染；5、試驗(yàn)結(jié)束后，操作過(guò)程中所有可能與生物危險(xiǎn)物接觸或被污染的實(shí)驗(yàn)器械或物品，能夠高壓的必須進(jìn)行高壓消毒；6、實(shí)驗(yàn)中發(fā)生意外污染情況，應(yīng)立即報(bào)告。實(shí)驗(yàn)室安全操作—原則實(shí)驗(yàn)室安全操作-意外事故處理1、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，如標(biāo)本或含標(biāo)本的前消化處理液被打翻，污染操作臺(tái)或地面，應(yīng)以吸滿75％乙醇溶液的衛(wèi)生紙覆蓋污染區(qū)，15分鐘后衛(wèi)生紙方可移去；2、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，如污染物濺落到身體表面，或有割傷、刺傷、燒傷、燙傷等情況發(fā)生，應(yīng)立即停止實(shí)驗(yàn)并進(jìn)行緊急處理；更換被污染的工作服，皮膚表面用消毒液清洗，傷口以碘酒及酒精消毒，眼睛用無(wú)菌生理

6、鹽水沖洗；3、被污染的器械等立即浸泡于含氯消毒劑或75％乙醇等溶液中，實(shí)驗(yàn)完成后再進(jìn)行高壓消毒處理；4、如果發(fā)生氣溶膠污染或大面積污染，應(yīng)立即停止實(shí)驗(yàn)并關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室，對(duì)實(shí)驗(yàn)區(qū)域和實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行紫外燈照射消毒2小時(shí)以上；對(duì)污染區(qū)域進(jìn)行空氣熏蒸消毒。實(shí)驗(yàn)室安全操作-絕對(duì)禁止的處理方法1、有可能造成污染面積擴(kuò)大，如使用75％乙醇或甲酚皂液擦洗被污染的區(qū)域；2、直接用火焰對(duì)未經(jīng)任何處理的污染地面、操作臺(tái)、器械進(jìn)行燒灼處理；3、使用消毒效果未經(jīng)證實(shí)的消毒劑進(jìn)行消毒；4、使用低濃度的消毒劑和紫外燈進(jìn)行短時(shí)間、長(zhǎng)距離照射消毒。實(shí)驗(yàn)室消毒與滅菌1、物理消毒：紫外線、高壓滅菌2、化學(xué)消毒：乙醇、過(guò)氧乙酸、苯酚、含

7、氯消毒劑3、注意事項(xiàng)物理消毒—紫外線1、紫外線對(duì)結(jié)核桿菌有一定的殺滅作用，用輻射強(qiáng)度在100μw/cm2以上的30W紫外線燈、相對(duì)濕度50%～70%的條件下，照射40min以上，對(duì)空氣中結(jié)核桿菌的殺滅效果可達(dá)99.9%以上；2、在液層厚度3mm含菌107～108cfu/ml的結(jié)核桿菌的菌懸液，用10W紫外線燈在距離0.5m處持續(xù)照射3分鐘，在距離1m處持續(xù)照射10分鐘后，菌懸液經(jīng)培養(yǎng)無(wú)活菌生長(zhǎng)；3、紫外線穿透力弱，通常用