臨床PCR檢驗(yàn)的室內(nèi)質(zhì)控方法

《臨床PCR檢驗(yàn)的室內(nèi)質(zhì)控方法》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。

1、臨床PCR檢驗(yàn)的室內(nèi)質(zhì)控方法衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心李金明存在的問題概念不清不知道具體怎么做不會(huì)寫室內(nèi)質(zhì)控的SOP不知道如何選擇室內(nèi)質(zhì)控物不會(huì)分析室內(nèi)質(zhì)控的結(jié)果室內(nèi)質(zhì)控SOP存在的問題責(zé)任人不清。質(zhì)控物的來源及濃度不清或不全，并且通常沒有說明陰性質(zhì)控物的來源。有些是自制，但制備方法不規(guī)范，沒有任何的質(zhì)量檢驗(yàn)，定量結(jié)果沒有溯源性。沒有明確所選用的質(zhì)控方法。對前20次的測定的室內(nèi)質(zhì)控沒有解決方法。沒有明確的失控判斷標(biāo)準(zhǔn)，只是做了一些失控的含糊敘述。并且一般都沒有陰性失控的判斷方法。沒有失控后的分析及處理措

2、施。室內(nèi)質(zhì)量控制（InternalQualityControl,IQC)的概念由實(shí)驗(yàn)室工作人員，采取一定的方法和步驟，連續(xù)評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)室工作的可靠性程度，旨在監(jiān)測和控制本實(shí)驗(yàn)室工作的精密度，提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗(yàn)的一致性，以確定測定結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報(bào)告的一項(xiàng)工作?？筛爬?(1)執(zhí)行者：實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員；(2)目的：監(jiān)測實(shí)驗(yàn)室測定的重復(fù)性；(3)功能：決定了當(dāng)批測定的有效性，報(bào)告可否發(fā)出。是對實(shí)驗(yàn)室測定的即時(shí)性評(píng)價(jià)。室內(nèi)質(zhì)量控制（IQC）的基本內(nèi)容主要包括三個(gè)方面：（1）測定前的

3、質(zhì)量控制；（2）統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)量控制；（3）質(zhì)量控制的評(píng)價(jià)。測定前的質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室設(shè)施、儀器設(shè)備及管理理想的試劑和操作方法人員培訓(xùn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施、儀器設(shè)備及管理實(shí)驗(yàn)室空間及工作流程的設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件的控制：溫濕度控制設(shè)備、穩(wěn)壓或不間斷電源理想的PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)A產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊工作流向擴(kuò)增區(qū)標(biāo)本制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊工作流向擴(kuò)增區(qū)標(biāo)本制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)理想的PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)B臨床PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)

4、計(jì)的一般原則各區(qū)獨(dú)立注意風(fēng)向因地制宜方便工作“十六字口訣”產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊工作流向擴(kuò)增區(qū)標(biāo)本制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)傳遞窗傳遞窗傳遞窗臨床PCR實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理的特點(diǎn)“無基因”概念實(shí)驗(yàn)室要有嚴(yán)格的人員進(jìn)入限制和程序使用合格的試劑和消耗品PCR實(shí)驗(yàn)室“污染”的主要來源臨床標(biāo)本中存在的大量待測微生物科研中得到的質(zhì)?？寺∫郧胺治鲅芯康奶囟ㄎ⑸锎罅看嬖谟趯?shí)驗(yàn)環(huán)境中的特定微生物以前擴(kuò)增產(chǎn)物的殘留污染。這也是PCR實(shí)驗(yàn)室最容易產(chǎn)生的將造成假陽性的“污染”。PCR實(shí)

5、驗(yàn)室的重要防“污染”措施實(shí)驗(yàn)室的嚴(yán)格分區(qū)及工作程序的嚴(yán)格遵守化學(xué)方法：實(shí)驗(yàn)臺(tái)面可使用10％的次氯酸鈉（漂白劑）清洗；有些物品比如放置擴(kuò)增反應(yīng)管的盤必須從污染區(qū)轉(zhuǎn)回到清潔區(qū)時(shí)，在轉(zhuǎn)回之前，應(yīng)將其置于2％~10％的次氯酸鈉溶液中過夜，并充分沖洗。紫外照射：實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、儀器設(shè)備、實(shí)驗(yàn)室空間UNG儀器設(shè)備及管理PCR儀、離心機(jī)、加樣器、恒溫設(shè)備等應(yīng)建立技術(shù)檔案，并定期維護(hù);PCR儀、加樣器、恒溫設(shè)備應(yīng)定期進(jìn)行校準(zhǔn)理想的試劑:試劑的質(zhì)檢核酸提取或標(biāo)本處理方法的抗干擾能力（能否有效地去掉PCR抑制物）測定下限

6、(Detectionlimit)（定性測定）測定準(zhǔn)確性和線性范圍批內(nèi)變異和批間變異試劑批間的一致性有否污染其他：外包裝、試劑的完整性、有效期、說明書等理想的操作方法按照試劑盒說明書操作即可嗎?操作中影響測定結(jié)果的關(guān)鍵環(huán)節(jié)寫出具有可操作性的SOP人員培訓(xùn)培訓(xùn)所涉及的范圍:儀器設(shè)備使用、維護(hù)和校準(zhǔn)；試劑、方法原理；質(zhì)量管理體系；相關(guān)法律法規(guī)、相關(guān)領(lǐng)域的新技術(shù)、新理念和新進(jìn)展；實(shí)驗(yàn)操作技能等。如何培訓(xùn)：講座、討論、自學(xué)和參加培訓(xùn)班等。培訓(xùn)的評(píng)估：書面考試、實(shí)驗(yàn)考核、討論心得、論文、綜述等。統(tǒng)計(jì)質(zhì)控方法

7、質(zhì)控物濃度的選擇每次（批）測定質(zhì)控物的數(shù)量及放置質(zhì)控規(guī)則Levey-Jennings質(zhì)控圖方法“即刻法”質(zhì)控方法“假陽性”的統(tǒng)計(jì)質(zhì)控方法質(zhì)控物濃度的選擇定量測定：測定線性范圍內(nèi)的高、中、低三種濃度定性測定：接近方法測定下限的濃度陰性質(zhì)控物每次（批）測定質(zhì)控物的數(shù)量及放置標(biāo)本數(shù)量如小于30，弱陽性和陰性質(zhì)控各1份，標(biāo)本數(shù)量增加，質(zhì)控物數(shù)量相應(yīng)按比例增加均勻分散于臨床標(biāo)本中，與臨床標(biāo)本一同處理（核酸提?。U(kuò)增時(shí)的排列順序，可排于標(biāo)準(zhǔn)品或校準(zhǔn)品之后，臨床樣本之前。但在擴(kuò)增儀中的位置，不應(yīng)永久性的固定的

8、在一個(gè)孔，而應(yīng)在每次擴(kuò)增檢測時(shí)，進(jìn)行相應(yīng)的順延，以使在一定的時(shí)間內(nèi)，可以盡可能的監(jiān)測每一個(gè)孔的擴(kuò)增有效性。陰性質(zhì)控樣本的種類陰性原血清樣本實(shí)驗(yàn)過程中帶入的空管僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液的管陰性原血清樣本的功能監(jiān)測實(shí)驗(yàn)室的以前擴(kuò)增產(chǎn)物的“污染”由實(shí)驗(yàn)操作所致的標(biāo)本間的交叉污染。具體地說，如強(qiáng)陽性標(biāo)本氣溶膠經(jīng)加樣器所致的污染、強(qiáng)陽性標(biāo)本經(jīng)操作者的手所致的污染、使用翻蓋離心管核酸提取時(shí)在較高溫孵育時(shí)蓋子崩開等擴(kuò)增反應(yīng)試劑的污染。核酸提取過程中帶入的空管監(jiān)測核酸提取過程中的實(shí)驗(yàn)室“污染”的存在（在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中