縊蟶分子遺傳學(xué)研究進(jìn)展【文獻(xiàn)綜述】

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1、畢業(yè)論文文獻(xiàn)綜述生物技術(shù)縊蟶分子遺傳學(xué)研究進(jìn)展摘要：目前有多種技術(shù)被用于縊蟶的分子遺傳研究，RAPD、ISSR、AFLP、等技術(shù)都對(duì)縊蟶的生物分子方面的研究具有顯著的作用。三種技術(shù)根據(jù)不同的原理對(duì)縊蟶進(jìn)行分子遺傳研究，具有各自不同的特點(diǎn)并適用于研究?？O蟶的分子遺傳研究已經(jīng)取得了可喜的成績(jī)，同樣的也具有著廣闊的研究前景。關(guān)鍵詞：縊蟶RAPDISSRAFLP群體遺傳縊蟶(SinonovaculaconstrictaLamark)隸屬軟體動(dòng)物門(mén)、瓣鰓綱、異齒亞綱、簾蛤目、竹蟶科，又名蟶子,廣泛分布于中國(guó)、日本和朝鮮等國(guó)的沿海地區(qū)。但由于近年海洋環(huán)境急劇惡化,同時(shí),隨著縊蟶養(yǎng)

2、殖面積的逐年擴(kuò)大,縊蟶野生種質(zhì)逐年減少。隨著“藍(lán)色革命”時(shí)代的迅速發(fā)展，海水貝類(lèi)養(yǎng)殖等相關(guān)研究日益興起，縊蟶為我國(guó)四大養(yǎng)殖貝類(lèi)之一，對(duì)它的研究和開(kāi)發(fā)利用受到越來(lái)越多的科研工作者的重視。本文就就用于縊蟶分子研究進(jìn)展加以綜述。一、分子遺傳學(xué)常用的技術(shù)1.1RAPD技術(shù)1.1.1RAPD技術(shù)的原理RAPD（RandomAmplifiedpoiymorphicDNA，隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA）技術(shù)是由美國(guó)杜邦公司的Wwlliams和加里福尼亞生物研究所Welsh領(lǐng)導(dǎo)的兩個(gè)研究小組于1990年同時(shí)提出的一種快速、簡(jiǎn)便、多態(tài)性檢出率高、可自動(dòng)化分析的一項(xiàng)新的DNA分子標(biāo)記技術(shù),其方法

3、是建立在PCR技術(shù)基礎(chǔ)上的,它以一系列人工合成的不同的隨機(jī)排列順序的寡聚核昔酸單鏈（通常為十聚體）為引物（Primer）對(duì)所研究的基因組總DNA（模板DNA）進(jìn)行PCR酶促體外擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)聚丙烯酞胺凝膠或瓊脂糖凝膠電泳分離,經(jīng)EB染色（或銀染或放射自顯影）來(lái)檢驗(yàn)擴(kuò)增產(chǎn)物DNA片段的多態(tài)性。其多態(tài)性反映了基因組相應(yīng)區(qū)域的DNA多態(tài)性。RAPD分析所用的一系列引物的堿基序列不同,但對(duì)任一特定引物,它與所檢測(cè)DNA(模板DNA)序列有特定的結(jié)合位點(diǎn)。當(dāng)引物在模板的兩條鏈上有互補(bǔ)位置,引物3′端相距在一定長(zhǎng)度范圍內(nèi)（一般為200~2000bp）,在DNA多聚酶催化下,就

4、可擴(kuò)增出DNA片段來(lái)。因此,當(dāng)檢測(cè)的模板DNA在這些區(qū)域發(fā)生DNA片段的插人、缺失或引物結(jié)合位點(diǎn)上的堿基突變時(shí),PCR產(chǎn)物就會(huì)增加、缺少或發(fā)生分子量的改變。雖然對(duì)每一引物而言,其檢測(cè)基因DNA多態(tài)性是有限的,但可用的引物數(shù)很多,可檢測(cè)區(qū)域幾乎覆蓋整個(gè)基因組。所以RAPD可以對(duì)整個(gè)基因組的DNA進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè)。這就是RAPD檢測(cè)多態(tài)性DNA的原理。1.1.2RAPD的特點(diǎn)RAPD技術(shù)不僅繼承了PCR效率高、特異性強(qiáng)和檢測(cè)容易的特點(diǎn),而且與其他DNA分子標(biāo)記相比起來(lái),有其獨(dú)到的優(yōu)勢(shì)，利用RAPD建立的遺傳圖譜,具有以下一些特點(diǎn)(1)RAPD技術(shù)可以在對(duì)物種沒(méi)有任何分子生物

5、學(xué)研究的情況下,對(duì)其進(jìn)行DNA多態(tài)性分析,構(gòu)建這些物種的基因指紋圖譜,并通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析為遺傳分析和分類(lèi)研究提供DNA分子水平的依據(jù),這是其他方法(如RFLP)所不能比擬的(2)此法技術(shù)簡(jiǎn)單,易于操作.它可以直接對(duì)生物基因組DNA多態(tài)性進(jìn)行分析,引物的設(shè)計(jì)是隨機(jī)的,因而無(wú)需做克DNA探針的分離,雜交膜的準(zhǔn)備及核苷酸序列分析等前期工作;(3)試驗(yàn)只需少量的DNA，高效靈敏。極少量材料（一片葉子、一段根尖,甚至幾個(gè)細(xì)胞）所含有的DNA即可滿足需要,并且不受季節(jié)、組織器官發(fā)育時(shí)期的限制(4)無(wú)放射性污染，RADP操作安全,不需用同位素示蹤,并且所用試劑毒性小,對(duì)人體一般不構(gòu)成危

6、害(5)較之RFLP標(biāo)記的遺傳圖譜更有效,具有更大的標(biāo)記密度。但它也有缺點(diǎn),RAPD標(biāo)記是顯性標(biāo)記,不能區(qū)別純合體和雜合體,從而使它提供的遺傳信息不夠完整在某些作物中,擴(kuò)增的穩(wěn)定性差。這些缺點(diǎn)的克服只有通過(guò)嚴(yán)格保證反應(yīng)條件來(lái)解決。1.2ISSR技術(shù)1.2.1ISSR-PCR的原理基因組中分布有以2~6bp為單位多次串聯(lián)重復(fù)的微衛(wèi)星DNA序列,如二核苷酸重復(fù)序列AT、GA、CT、AG、AC、TC等,三核苷酸重復(fù)序列AGC、ACC、CTC、TAT等,四核苷酸重復(fù)序列CCCT、CTAG、GATA等,五核苷酸重復(fù)序列CTTCA、GGAGA等。這種分布于常染色質(zhì)、高度重復(fù)的簡(jiǎn)單

7、序列,稱為微衛(wèi)星DNA(MicrosatellitesDNA),也稱簡(jiǎn)單重復(fù)序列(Simplesequencerepeats,SSR)或短串連重復(fù)(Shorttandemrepeats,STR)。早在1974年,Skinner等研究寄居蟹基因組的衛(wèi)星DNA時(shí)就發(fā)現(xiàn)基因組內(nèi)存在SSR;Hamada等報(bào)道從酵母到脊椎動(dòng)物,所有真核生物的基因組中均能發(fā)現(xiàn)poly(dT-dG)n核心序列的多拷貝短序列;此后Tautz等、Stalling等發(fā)現(xiàn)在人、老鼠、雞及多種植物等真核生物的基因組中廣泛存在SSR,其不僅分布于內(nèi)含子、編碼序列及外顯子中,也可散布在2個(gè)或多