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《磁珠法快速提取鑒定DNA的實驗研究.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、生物學通報】拓年第卷第期磁珠法快速提取鑒定的實驗研究’’’’王平康駱延王光志程玉泉駱力河南科技大學河南洛陽洛陽綠谷科技有限公司河南洛陽。、摘要探索用磁珠法進行動植物的快速提取與電泳鑒定實驗操作簡捷直觀降低了實驗成本,,以在、、提升了實驗水平使得高純度的提取實驗今后可大學生中學生的生物學遺傳學實,、。驗室進行給更多的學生和教師科研人員參與生命科學的研究提供了機會關(guān)健詞磁珠提取鑒定瓊脂糖電泳磁珠是一種包被有生物活性基團的功能化載體,可檢材準備提前準備,供全班使用。取市分散于基液中形成磁性液體材料,它兼有液體的流動性售香菜
2、葉一,在研缽內(nèi)稍加研磨,成粗絲狀即可,和固,一。一,體磁性顆粒材料的雙重特點從而使固液相的分時間約然后加人細胞裂解液用干凈玻離變得十分方便快捷。磁珠法特異性地把分離技,放人水浴箱中的隔板上,恒溫,璃棒攪勻℃時間,。。術(shù)和富集技術(shù)有機的結(jié)合為一體通過簡單的洗脫即可每隔用玻璃棒攪勻取出后放涼以得到純度很高的靶物質(zhì)。磁珠法的出現(xiàn)和應(yīng)用,,再慢慢吸取上清約轉(zhuǎn)移至的試劑瓶,。。給生命科學的研究提供了一種新式的手段和武器也給中備用實驗時每個小組吸取上清即可若單獨大、中學生對的直觀認識提供了一個簡捷、客觀的作實驗時,取香菜葉或血液
3、直接加人。一。實驗途徑裂解液仿此操作即可,,,材料和設(shè)備水浴箱準備實驗前開啟恒溫℃檢材香菜葉、芹菜葉、洋蔥花菜、白色花瓣、各里面放人多孔或網(wǎng)狀隔板,與水面相平。、、、、,種花蕊干燥野菊花玉米大豆胚胎人類抗電泳緩沖液準備取電泳緩沖液母液加,,。,,。凝全血可任選一種優(yōu)選使用花蕊和菜葉蒸餾水至即成電泳緩沖液使用液夠全班使用注不推薦使用雞血,因禽流感等動物病毒較多,瓊脂糖凝膠板制作準確稱取電泳級瓊脂所,,,,以一般情況下學生實驗盡量不使用血液制品若必糖放人的三角燒瓶中加蒸餾水巧水浴須實驗,建議到醫(yī)院化驗室或血站聯(lián)系購置無傳
4、染病℃,時間約,使瓊脂糖徹底溶解成無色透明的毒的純凈血液。貓稠溶液,取出后,加入熒光染料液林,攪勻,緩緩,,,,,,試劑細胞裂解液磁珠懸液洗滌液洗脫液傾人到個插有孔梳子的制板盒中膠液面與盒上緣,,。。,,可電泳緩沖液母液電泳指示液熒光染料液相平約后膠液完全凝固再慢慢拔出梳子看到,,,,、、、、、,設(shè)備微量移液器吸頭磁架離心管清晰完整的個上樣膠孔依次為泳道,,,,,。管電泳槽凝膠盒直流電源紫外線燈每小組占用個泳道第泳道作為空白陰性對照箱,水浴箱,試管架,燒杯,孔塑料點滴板。塊凝膠板可供全班個電泳大組使用。實驗原理提取操
5、作步驟,,。磁珠法中的細胞裂解液是一種蛋白變性劑可使動現(xiàn)以植物葉提取為例其他檢材仿此操作,,植物的細胞膜裂解并使與結(jié)合的蛋白質(zhì)變性加人磁珠在微量離心管管中加人,,林,游離釋放磁珠可以特異性地吸附通過洗預(yù)先準備好的香菜葉上清液再加人搖,、,林,,,。滌去除以外的蛋白質(zhì)等雜質(zhì)再用洗脫液勻的磁珠懸液蓋緊上蓋顛倒混勻放置而解離吸附在磁珠上的,得到純度和濃度均很高的磁分離把管放到磁架上,靜置半分鐘,磁,可用于模板、基因工程等。珠自動被吸附在管壁上,吸棄上清,磁分離操作要在,,以。瓊脂糖是一種鏈狀多糖其載樣凝膠在緩沖液中磁架上完
6、成避免吸掉磁珠接通直流電源的情況下,帶負電荷的分子可通洗滌從磁架上取下管,加人洗滌液,,吸,,。過瓊脂糖凝膠中的網(wǎng)孔從負極向正極泳動由于熒光使磁珠與洗滌液混合均勻磁分離吸棄上清,,開,,染料分子可插入分子的個堿基之間在紫外重復(fù)洗滌一次蓋放置使磁珠干燥管內(nèi)及。。線的照射下可呈現(xiàn)出桔紅色的熒光管蓋上殘液要抽凈實驗前準備洗脫加人洗脫液林,抽吸混勻,蓋,,,℃,分組設(shè)計若全班個學生人為一實驗小緊上蓋插人到水浴箱隔板上溫育而取出組,共小組,人中人主管操作,人監(jiān)督提示。管后立即放到磁架上,吸取上清至新的管每小組編為個電泳大組。中
7、,供作電泳鑒定用。叉年第卷第期生物學通報,。一電泳鑒定操作步驟道為牡丹花蕊濃度為卜比值為值一值,均在左右,說明磁珠法提取的純指示液點樣每個電泳大組領(lǐng)取預(yù)先準備好的度。,,和濃度都很高瓊脂糖凝膠連同膠框塊水平放置在桌面上另取,,磁珠法提取人類全血電泳圖及紫外分光孔塑料點滴板塊吸取藍色的電泳指示液林在點,,光度計檢測結(jié)果滴板孔中點成個小圓點共個圓點每個圓點供。個小組使用上樣仔細吸取洗脫液卜,小心加到藍色圓點上,慢慢抽吸次混勻,準確地注入到膠塊上的小孔內(nèi),每個小孔代表個泳道,第泳道為空白陰性對照換用新吸頭吸取林蒸餾水替代洗
8、脫液。泳道排列順序從膠塊切角端算起,分別作為圖磁珠法提取人類全血電泳圖、、、、、,。泳道各小組要記清楚自己的泳道裹全血紫外分光光度計檢測結(jié)果,上樣電泳把膠塊放到電泳槽中間的托板上孔一編號比值濃度一端朝向電源的負極端,再向電泳槽中傾人電泳緩沖液,。使用液使液面剛好浸沒膠塊為準開啟電泳儀電源開,關(guān),控制電壓一,電流一,電泳時間,,。電泳儀有路輸出可
