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《淺談人參二醇組皂苷對(duì)血漿血管緊張素ⅱ淺談人參二醇組皂苷對(duì)血漿血管緊張素ⅱ誘導(dǎo)心肌.》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、淺談人參二醇組皂苷對(duì)血漿血管緊張素II淺談人參二醇組皂苷對(duì)血漿血管緊張素II誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大的影響分析湖南省宜章縣屮醫(yī)院湖南宜章424200摘要：目的：對(duì)人參二醇組皂苷對(duì)血漿血管緊張素n誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥人的影響進(jìn)行分析。方法：對(duì)2口齡的Wistar大鼠的乳鼠心肌細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，且利用AngII進(jìn)行誘導(dǎo)后建立相應(yīng)的心機(jī)細(xì)胞肥人模型，將其隨機(jī)分為三組，PDS低劑量組，PDS高劑量組、肥人模型組，另外設(shè)立一個(gè)正常的對(duì)照組，通過LeicaQWin病理圖像分析系統(tǒng)對(duì)心肌細(xì)胞的表面積進(jìn)行測(cè)定，采用BCA法對(duì)心肌細(xì)胞屮蛋白質(zhì)的總含量進(jìn)行測(cè)定，采用熒光分光光度計(jì)對(duì)細(xì)胞屮
2、游離鈣離子的濃度進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：PDS可以使肥人心肌細(xì)胞的表面積顯著減少，使心肌細(xì)胞屮總蛋白質(zhì)的含量、鈣離子的濃度降低。結(jié)論：PDS對(duì)Angll誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大有相應(yīng)的抑制作用，其有可能與隔絕鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶的信號(hào)傳導(dǎo)通路相關(guān)。關(guān)鍵詞：人參二醇組皂苻；血管緊張素II;心肌細(xì)胞肥大人參二醇組皂苷(PDS)主要是從五加科植物屮的人參莖葉提取純化而得，其包括人參Rbl，Rd,Rb2,Rc等一些皂苷單體。PDS具有抗心機(jī)梗死、抗休克、降低血糖、使血脂代謝紊亂得以改善的作用，在本研究屮顯示，PDS可以使縮血管物質(zhì)的含量降低，增強(qiáng)抗氧化的能力，說(shuō)明PSD在大鼠心梗之后
3、還可以對(duì)心室重構(gòu)起到相應(yīng)的保護(hù)作用。本文主要就人參二醇組皂苷對(duì)血漿血管緊張素II誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大的影響進(jìn)行分析，現(xiàn)作報(bào)道如卜：1.資料與方法1.1動(dòng)物選用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物屮心的2口齡Wistar人鼠乳鼠，其主要是用來(lái)培養(yǎng)體外的心肌細(xì)胞。1.2乳鼠心肌細(xì)胞分組、原代培養(yǎng)、處理對(duì)乳鼠的心肌細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)選取2口齡Wistar人鼠乳鼠的心臟，采用PBS對(duì)其腔室中的血液進(jìn)行沖洗，并將結(jié)締組織、心房剪掉，并把心室全部剪碎，剪為lmm3左右的組織塊，采用0.125%的胰酶在溫度為37°C的水中進(jìn)行多次消化，II每次約保持5min。以10%的小牛血清來(lái)終止消化，并對(duì)其
4、進(jìn)行5min的離心，待細(xì)胞沉淀之后利用DMEM進(jìn)行培養(yǎng)，重懸之后接種在培養(yǎng)瓶中，在CO₂孵箱中進(jìn)行90min的培養(yǎng)，并利用差速貼壁將非心肌細(xì)胞全部去除。對(duì)細(xì)胞的濃度進(jìn)行調(diào)整，將0.1mmol/L5'溴脫氧尿苷加入其中，并接種到相應(yīng)的培養(yǎng)板上，在CO₂孵箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)48h之后對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行更換，72h后將其倒置在顯微鏡下進(jìn)行觀察。另外，在心機(jī)細(xì)胞中加入濃度相同的PDS、體積相等的心肌細(xì)胞培養(yǎng)液，II加入劑量為10-7mol/L的Angll讓其作用48h。分組和處理：肥大模型組：10-7mol/L的AngII,對(duì)照組：等體積的培養(yǎng)
5、液，PDS高劑量組:10-7mol/L的AngII和800μg/mlPDS,PDS低劑量組:PDS400μg/ml、10-7mol/L的Angll。1.3測(cè)定心肌細(xì)胞的表面積將lml的l×105個(gè)/ml心肌細(xì)胞懸液接種在24孔的培養(yǎng)板中，且通過上述的分組處理之后，利用胰酶對(duì)心肌細(xì)胞進(jìn)行消化并使其脫壁，且反復(fù)進(jìn)行輕柔、將細(xì)胞吹散，然后靜置、照相。通過LeicaQWin病理圖像分析系統(tǒng)對(duì)心肌細(xì)胞的表面積進(jìn)行詳細(xì)的測(cè)定，每一個(gè)組中檢測(cè)五個(gè)視野，取平均值來(lái)進(jìn)行對(duì)比分析。1.4測(cè)定心肌細(xì)胞中的總蛋白含量將2.5ml的3×105個(gè)
6、/ml心肌細(xì)胞懸液接種在6孔的培養(yǎng)板中，通過上述的分組處理之后，將上層的培養(yǎng)液棄除，對(duì)PBS進(jìn)行預(yù)冷、沖洗、輕柔，再把Western及IP細(xì)胞裂解液依次加到每個(gè)孔中，采用移液器對(duì)Jt?進(jìn)行吹打，讓裂解液充分接觸到細(xì)胞，進(jìn)行裂解之后，進(jìn)行5min的離心，并將上清收集好，即為細(xì)胞中的總蛋白。然后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線將各組細(xì)胞中的蛋白濃度求出來(lái)，并將單個(gè)細(xì)胞的總蛋白量計(jì)算出來(lái)。1.5測(cè)定心肌細(xì)胞中細(xì)胞游離鈣離子的濃度在6孔的培養(yǎng)板中接種2.5ml的3×105個(gè)/ml心肌細(xì)胞懸液，同樣經(jīng)過上述的分組處理之后，利用胰酶使心肌細(xì)胞得到消化，并讓其脫壁，細(xì)胞的濃度
7、必須超過106個(gè)/ml,且取lml放到EP管內(nèi)。在每一個(gè)實(shí)驗(yàn)組的管內(nèi)加入Fura-2/AM的儲(chǔ)備液5μl，待其最終的濃度為5μmol/L吋，進(jìn)行搖床、震動(dòng)(37°C，60rain),讓Fura-2/AM充分和細(xì)胞進(jìn)行反應(yīng)。進(jìn)行1200r/rain的離心5min,在利用D-Hank平衡鹽溶液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行清洗兩次，讓細(xì)胞懸浮，然后加入玻璃比色杯內(nèi)，再通過熒光分光光度計(jì)對(duì)其進(jìn)行詳細(xì)的測(cè)定。首先對(duì)340nm、380nm激發(fā)光中產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)定，將0.1%的TntonX-100加入艽中，再對(duì)其產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度進(jìn)行詳細(xì)的測(cè)定，之后加入5mmol/L的E
8、GTA，同樣再次進(jìn)行測(cè)定；根據(jù)相關(guān)公式即可計(jì)算出相應(yīng)的結(jié)果［1】。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方
