干旱脅迫對(duì)小麥幼苗的影響

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1、干旱脅迫對(duì)小麥幼苗生理生化指標(biāo)的影響楊萬(wàn)坤11412023811應(yīng)用生物教育A班摘要：用小麥幼苗為實(shí)驗(yàn)材料，研究干旱脅迫對(duì)小麥幼苗生理生化指標(biāo)的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明：在干旱脅迫(5天)下小麥幼苗中脯氨酸（Pro）、丙二醛（MDA）、過(guò)氧化氫（H2O2）、抗氧化酶（PPO、POD）、谷胱甘肽(GSH)、ASA的含量都較正常情況下小麥幼苗的含量高。關(guān)鍵字：干旱脅迫、小麥幼苗、Pro、MDA、H2O2、PPO、POD、GSH、ASA引言：小麥?zhǔn)俏覈?guó)北方地區(qū)的主要糧食作物，但是近幾年北方地區(qū)旱情日益嚴(yán)重，小麥產(chǎn)量安全問(wèn)題日益突出。干旱也屬于逆境，水分在植物的生命活動(dòng)中占主導(dǎo)地位，大多數(shù)植物遭受干旱

2、逆境后各個(gè)生理過(guò)程都會(huì)受到不同程度的影響。干旱是我國(guó)農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展面臨的主要問(wèn)題之一,干旱脅迫對(duì)植物的影響是一個(gè)復(fù)雜的生理生化過(guò)程,涉及到許多生物大分子和小分子【1】。干旱脅迫對(duì)植物的影響主要體現(xiàn)在酶活性、膜系統(tǒng)、細(xì)胞失水等，導(dǎo)致細(xì)胞代謝紊亂，甚至是細(xì)胞死亡。本次試驗(yàn)測(cè)定正常生長(zhǎng)的小麥幼苗和干旱脅迫處理小麥幼苗中脯氨酸（Pro）、丙二醛（MDA）、過(guò)氧化氫、抗氧化酶（PPO、POD）、谷胱甘肽(GSH)、ASA的含量變化,來(lái)研究干旱脅迫對(duì)小麥的影響，從而找到合適的方法來(lái)解決干旱脅迫問(wèn)題，解決小麥生產(chǎn)安全問(wèn)題提供理論依據(jù)。1材料與方法1.1材料及處理將小麥種子用0.1%HgCl2消毒10m

3、in后，用蒸餾水漂洗干凈，用蒸餾水于26℃下吸漲12h，然后播于墊有6層濕潤(rùn)濾紙的帶蓋白磁盤(pán)（24cm×16cm）中→于26℃下暗萌發(fā)60h，計(jì)算發(fā)芽率（注意與前面結(jié)果比較），選取長(zhǎng)勢(shì)一致的小麥幼苗做干旱5天干旱處理。5天后用相同的方法分別對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的小麥進(jìn)行脯氨酸、MDA、過(guò)氧化氫、抗氧化酶（PPO、POD）、GSH、ASA的含量的測(cè)定。1.2測(cè)定方法1.21玉米種子發(fā)芽率的測(cè)定各取50粒吸脹的玉米種子→沿胚的中心線(xiàn)切成兩半（嚴(yán)格區(qū)分兩個(gè)半粒），進(jìn)行下列實(shí)驗(yàn)：其中50個(gè)半粒進(jìn)行TTC染色（30℃水浴20min），另50個(gè)半粒進(jìn)行曙紅染色（室溫染色10min）洗凈后觀(guān)察。根據(jù)兩種方

4、法的染色情況，分別計(jì)算發(fā)芽率。1.22小麥幼苗脯氨酸含量的測(cè)定分別取0.1g實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的胚芽鞘→加入3ml3%磺基水楊酸（SSA）和少許石英砂→充分研磨→用2ml3%SSA洗研缽→5000rpm離心10min→量上清液體積。測(cè)定：上清液各2ml→分別加入2ml冰乙酸和2ml茚三酮試劑→煮沸15min→冷卻后→5000rpm離心10min（若沒(méi)沉淀可省略次步驟）→分別測(cè)定A520,將測(cè)得的結(jié)果用公式Procontent=（umol.g-1FW）計(jì)算出正常和干旱生長(zhǎng)小麥的胚芽鞘的脯氨酸含量。1.23小麥幼苗MDA含量的測(cè)定分別取0.1g實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組→加入3ml10％TCA(和少許石英砂

5、→充分研磨→用2ml10％TCA洗研缽→5000rpm離心10min→量上清液體積。測(cè)定：分別取上清液各2ml→加入0.6%TBA（用10%TCA配制）2ml→煮沸15min→冷卻后→5000rpm離心10min→分別測(cè)定OD450和OD532將測(cè)得的D450和OD532的數(shù)據(jù)帶入下列公式OD450=C1x85.4OD532=C1x7.4＋C2X155000求解方程得：C1/(mmol/L)=11.71OD450C2/(umol/L)=6.45OD532—0.56OD450計(jì)算出C1可溶性糖的濃度，C2為MDA的濃度。1.24小麥幼苗H2O2測(cè)定分別取0.51g實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組→加入3ml

6、0.3%TCA和少許石英砂→充分研磨→用2ml0.3%TCA洗研缽→5000rpm離心10min→量上清液體積。測(cè)定：分別取上清液各4ml→加入0.1%Ti(SO4)2[用20%(v/v)H2SO4配制]1ml→搖勻→5000rpm離心10min→OD410將測(cè)得的OD410值帶入下列公式H2O2content=（umol.g-1FW）計(jì)算出H2O2酶的含量。1.25小麥幼苗抗氧化酶的測(cè)定1、分別取0.1g實(shí)驗(yàn)材料→加入少許石英砂和3ml提取液（50mmol/LPBS,pH6.0,內(nèi)含0.1mmol/LEDTA,1%PVP）→充分研磨　→轉(zhuǎn)入離心管中→用2ml提取液洗研缽→5000rpm

7、離心10min→量上清液體積→用于測(cè)定POD和PPO酶活性或分裝后轉(zhuǎn)至-20或-80℃保存。2、POD測(cè)定：取POD反應(yīng)混合液（10　mmol/L愈創(chuàng)木酚，5mmol/LH2O2,用PBS溶解）2.95ml，加入酶液50ul（空白調(diào)零用PBS取代），立即記時(shí)，搖勻，每過(guò)1min記錄一次在A470的讀數(shù)值。3、PPO測(cè)定：取PPO反應(yīng)混合液（20mmol/L鄰苯二酚，用PBS溶解）2.9ml，加入酶液0.1ml（空白調(diào)零用PBS取代）