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1、三聚氰胺的樣品前處理及最新LC-MS檢測(cè)方法：ASB親水色譜柱三聚氰胺的樣品前處理及最新檢測(cè)方法張俊燕，何呂興（北京艾杰爾科技有限公司，北京，100085）???摘?要??三聚氰胺是一種重要的化工材料，常用于制造三聚氰胺樹脂，是建筑業(yè)中常用的防火材料，本來(lái)與食品、飼料行業(yè)毫不相干，但是發(fā)生在美國(guó)的數(shù)起飼料致死寵物的事件使兩者聯(lián)系在一起。經(jīng)過(guò)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)這些進(jìn)口飼料中含有一定濃度的三聚氰胺，對(duì)此，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）要求飼料廠商提供三聚氰胺的檢測(cè)報(bào)告，因此，三聚氰胺事件也使得分析領(lǐng)域掀起了檢測(cè)方法的開(kāi)發(fā)熱潮，艾杰爾科技有限公司具有較高的敏感度，迅速開(kāi)發(fā)了優(yōu)越的檢測(cè)方

2、法，本文將詳細(xì)論述。???關(guān)鍵詞??三聚氰胺，樣品前處理，LC-MS1前言???三聚氰胺事件變成社會(huì)熱點(diǎn)話題是在07年3月份，美國(guó)大量召回被三聚氰胺污染的寵物飼料，起因于寵物飼料致死貓狗的事件。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，北美地區(qū)僅美國(guó)因食用有毒飼料而死亡的寵物就有上萬(wàn)只,相關(guān)投訴不計(jì)其數(shù)，美國(guó)食品藥品管理局調(diào)查顯示，在回收的寵物食品、死亡動(dòng)物的尿液結(jié)晶和腎臟細(xì)胞中都發(fā)現(xiàn)有三聚氰胺，研究人員還發(fā)現(xiàn),回收寵物食品所用的小麥谷蛋白添加物中有較高濃度的三聚氰胺存在。盡管國(guó)內(nèi)尚無(wú)動(dòng)物中毒死亡或產(chǎn)生不良反應(yīng)的報(bào)道，對(duì)于三聚氰胺的毒性也有些爭(zhēng)議，但三聚氰胺不是飼料原料，也不是國(guó)家允許使用的飼料添加物

3、。某些不法廠商添加三聚氰胺主要是為了增加產(chǎn)品的表觀蛋白質(zhì)含量，三聚氰胺被廣泛的添加到淀粉、谷朊粉、蛋白粉中，致使不僅是飼料生產(chǎn)商，其它的食品工廠也需要三聚氰胺的檢測(cè)以保證他們產(chǎn)品的安全。???本文采用固相萃取法對(duì)樣品進(jìn)行前處理，并對(duì)比了不同的檢測(cè)方法,包括FDA公布的檢測(cè)方法〔1〕對(duì)三聚氰胺分析的影響。???三聚氰胺(melamine)簡(jiǎn)稱三胺,學(xué)名三氨三嗪,別名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺，分子式：C3N6H6、C3N3(NH2)3。分子量：126.12，是一種重要的氮雜環(huán)有機(jī)化工原料〔2〕。三聚氰胺顯弱堿性，能夠與各種酸反應(yīng)生成三聚氰胺鹽。在強(qiáng)酸或強(qiáng)堿液中，三聚氰胺發(fā)生水解

4、，胺基逐步被羥基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸。三聚氰胺與醛類反應(yīng)生成加成化合物。三聚氰胺與醛反應(yīng)制成樹脂，三聚氰胺樹脂是一種多種用途的材料，防火耐熱且有很高的穩(wěn)定性，用于生產(chǎn)塑料、廚房用具、防火纖維、商業(yè)濾膜、膠水和阻燃劑，部分亞洲國(guó)家，也被用來(lái)制造化肥。2材料與試劑2.1儀器與條件?????Agilent1100高效液相色譜儀（美國(guó)，Agilent公司）；二極管陣列檢測(cè)器（DAD），檢測(cè)波長(zhǎng)240nm，柱溫：40℃。?????（1）AgelaVenusilTMASBC18（4.6×250mm）；緩沖液：10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉；流動(dòng)相：緩沖

5、溶液:乙腈=85:15；流速：1.0mL/min。??????（2）AgelaVenusilTMASBC8（4.6×250mm）；流動(dòng)相：緩沖液：乙腈=85：15；緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調(diào)pH為3.0；流速：1.0mL/min；?????離子交換固相萃取柱AgelaClearnertTMPCX(北京艾杰爾科技有限公司)6圖?PCX結(jié)構(gòu)式2.2試劑與樣品???寵物飼料樣品（農(nóng)業(yè)部飼料供應(yīng)中心提供）；甲醇、乙腈為北京艾杰爾科技有限公司提供；氨水、乙酸鉛、三氯乙酸、均購(gòu)于北京化學(xué)試劑公司；三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品、檸檬酸、辛烷磺酸鈉（Sigma公司）；甲醇為色譜純，其

6、他均為化學(xué)純。3實(shí)驗(yàn)方法3.1樣品前處理方法(1)標(biāo)準(zhǔn)樣品配制：???取50mg三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的標(biāo)準(zhǔn)溶液，使用時(shí)，以提取液(0.1%三氯乙酸)稀釋至所要的濃度。(2)提?。???稱取飼料樣品5g，加入50ml0.1%三氯乙酸提取液，充分混勻，加入2mL2%乙酸鉛溶液，超聲20min。然后取部分溶液轉(zhuǎn)移至10mL離心管中，8000rpm/min離心10min，取上清液3mL過(guò)混合型陽(yáng)離子交換小柱(PCX)。(3)凈化(PCX小柱，60mg/3mL)：???a)活化及平衡：3mL甲醇，3mL水???b)上樣：加入提取液3mL??

7、?c)淋洗：3mL水；3mL甲醇；棄去淋洗液并將小柱抽干。???d)洗脫：5mL5%氨化甲醇(v/v)洗脫。(5%氨化甲醇的配制：5mL氨水+95mL甲醇)。???e)濃縮：50℃，氮?dú)獯蹈桑?0%甲醇/水定容至2mL，HPLC分析或衍生后GC/MS分析。????3.2HPLC檢測(cè)方法3.2.1三聚氰胺HPLC-UV檢測(cè)方法???三聚氰胺是強(qiáng)極性化合物，在傳統(tǒng)的反相C18柱上保留很差，需要用離子對(duì)試劑色譜方法才能有良好的保留與分離，按照美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）的三聚氰胺檢測(cè)方法和中國(guó)農(nóng)業(yè)部公布的三聚氰胺檢測(cè)