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1、平邑甜茶論文：平邑甜茶MhWRKY15基因的克隆及表達(dá)分析【中文摘要】轉(zhuǎn)錄因子是結(jié)合在基因特定DNA序列上的蛋白質(zhì),它通過增強(qiáng)或抑制基因的轉(zhuǎn)錄效率來調(diào)控基因的表達(dá)水平,真核生物的基因表達(dá)調(diào)控主要是在轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行。WRKY轉(zhuǎn)錄因子作為一種重要的誘導(dǎo)型調(diào)節(jié)因子,參與植物的多種防衛(wèi)反應(yīng)、生長發(fā)育調(diào)節(jié)以及物質(zhì)代謝調(diào)節(jié)等各種重要生理活動。平邑甜茶(Malushupehensis(Pamp)Rehd.varpinyiensisJiang)是我國特有的植物資源,常用作蘋果和觀賞海棠的砧木。本研究以平邑甜茶為試材,克隆了MhWRKY15基因的全長cDNA序列,并運(yùn)用
2、生物信息學(xué)手段分析了其基因序列與編碼蛋白的性質(zhì)和功能;同時(shí),研究了其在生長過程及逆境脅迫下的表達(dá)情況,并成功構(gòu)建RNAi載體并轉(zhuǎn)化擬南芥,獲得轉(zhuǎn)基因擬南芥植株。主要結(jié)果如下:1).獲得了平邑甜茶MhWRKY15基因,該基因cDNA全長1091bp,含有810bp的完整開放閱讀框,編碼269個(gè)氨基酸,屬于WRKY類轉(zhuǎn)錄因子的第II組,為WRKY15家族成員。GenBank登錄號為GU576874。2).生物信息學(xué)分析表明,MhWRKY15編碼蛋白為可溶性蛋白,其分子式為C_(1263)H_(1...【英文摘要】Transcriptionfactorsw
3、ereproteinsthatbindingwithspecificDNAsequencesoftargetgene,whichcouldregulategeneexpressionbyenhancingorinhibitingtheefficiencyofgenetranscription.Regulationofthegeneexpressionineukaryoticwasmainlyatthetranscriptionallevel.WRKYtranscriptionfactorwasanimportantinducibleregulator
4、yfactorwhichparticipatedinavarietyofimportantphysiologicalactivities,suchasplantdefenseresponses,growthregulationandmetabolismregulation.Malus...【關(guān)鍵詞】平邑甜茶WRKY15基因分離RNAi擬南芥轉(zhuǎn)化半定量RT-PCR【英文關(guān)鍵詞】Malushupehensis(Pamp)Rehd.WRKY15geneisolationRNAiTransformationofArabidopsisthalianasemiR
5、T-PCR【目錄】平邑甜茶MhWRKY15基因的克隆及表達(dá)分析英文縮寫符號及其中英文對照表4-9中文摘要9-10Abstract10-111 前言12-231.1WRKY的結(jié)構(gòu)特征及其分類12-131.2WRKY轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)域13-141.3WRKY轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)及其生物學(xué)功能14-201.3.1WRKY轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)特性14-151.3.2WRKY轉(zhuǎn)錄因子在植物防衛(wèi)反應(yīng)中的作用15-171.3.3WRKY轉(zhuǎn)錄因子在植物形態(tài)建成中的作用171.3.4WRKY轉(zhuǎn)錄因子在植物代謝中的作用17-181.3.5WRKY與MAPK相互作用關(guān)系18-201.4
6、果樹轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展20-221.5本研究目的和意義22-232材料與方法23-372.1試驗(yàn)材料23-242.1.1試材232.1.2菌株與質(zhì)粒232.1.3酶及生化試劑232.1.4PCR引物23-242.2試驗(yàn)方法24-372.2.1平邑甜茶總RNA的提取24-252.2.2RT-PCR反轉(zhuǎn)錄合成cDNA25-262.2.3MhWRKY15全長序列的擴(kuò)增26-312.2.3.1巢式PCR擴(kuò)增MhWRKY15中間片段26-272.2.3.23’-RACE擴(kuò)增3’端序列272.2.3.35’-RACE獲得5’端序列27-312.2.4DNA片段與克
7、隆載體的連接312.2.5大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備和轉(zhuǎn)化31-322.2.5.1大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備312.2.5.2大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化31-322.2.6堿法小量質(zhì)粒DNA的提取322.2.7凝膠電泳中DNA片段的回收32-332.2.8質(zhì)粒DNA的酶切鑒定332.2.9DNA序列測定332.2.10pFGC5941-RNAi-MhWRKY15表達(dá)載體的構(gòu)建33-342.2.11擬南芥轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)化植株的PCR鑒定34-352.2.12pCAMBIA1390-MhWRKY15-GFP表達(dá)載體的構(gòu)建352.2.13根癌農(nóng)桿菌GV3101和EHA
8、105感受態(tài)細(xì)胞的制備與轉(zhuǎn)化35-362.2.13.1根癌農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備35-362.2.13.2凍融
