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《cypj蛋白晶體結(jié)構(gòu)解析及其抑制劑的篩選和鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、復(fù)旦大學博士后學位論文CyPJ蛋白晶體結(jié)構(gòu)解析及其抑制劑的篩選和鑒定姓名：趙雪梅申請學位級別：博士后專業(yè)：醫(yī)學遺傳學指導(dǎo)教師：余龍20050601博十后出站報告CyPJ蛋白晶體結(jié)構(gòu)解析及兌抑制劑的篩選和鑒定摘要Cyclophilins是一類進化中高度保守廣泛存在的蛋白，這一家族的蛋白都具有肽酰脯氨酰順反異構(gòu)酶活性，這種活性通常被CsA抑制。我們對cyclophilins家族的新成員CyPJ的晶體結(jié)構(gòu)和CyPJ蛋白抑制劑的篩選、鑒定及其生物學活性進行了研究。1、利用CyPA的結(jié)構(gòu)作為研究模型，通過分子置換法在2．6A分辨率確定了CyPJ的三維結(jié)構(gòu)。CyP
2、J分子含有4個螺旋和一個由8個反平行B鏈形成的B圓桶。CYPJ的二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)類似于CyPA的二、三級結(jié)構(gòu)，但CyPJ含有一個額外的二硫鍵和4個片段的構(gòu)造明顯地不同于CyPA。根據(jù)于CyPA進行序列比對，確定CyPJ的活性位點為His43和GIn52，在CyPJ結(jié)構(gòu)中靠近His43和GIn52處有一個保守的水分子Wat226。2、論文的第三章，介紹了針對cyPJ的虛擬篩選工作。在此工作中，首先采用了藥效團數(shù)據(jù)庫搜尋以產(chǎn)生一個較小的分子數(shù)據(jù)庫，然后再采用分子對接方法對產(chǎn)生的數(shù)據(jù)庫進行搜尋，然后利用BIACORE分子相互作用分析儀進行驗證。結(jié)果表明在篩
3、選出的cyPJ蛋白的63個候選小分子化合物中有侶個分子顯示了與CyPJ具有較好的結(jié)合作用。3、采用o【一胰凝乳蛋白酶活性測定法檢測CyPJ活性及CyPJ與小分子化合物相互作用后的活性。結(jié)果表明：(1)CyPJ具有脯氨酸異構(gòu)酶活性，并且其活性可被CsA和ZXM-A一1所抑制，IC50分別為4．929±0．25鈕M和155．692±41．59鯽M；(2)通過計算機輔助設(shè)計和BIACORE分子相互作用儀驗證后篩選到的CyPJ的小分子化合物對CyPJ活性的抑制作用不同，它們的lC50值從5．815—21．32舳M不等；(3)通過PPlase活性檢測后，可以證明
4、通過計算機輔助設(shè)計和BIACORE分子相互作用儀驗證后篩選到的部分小分子化合物對CyPJ活性沒有抑制作用，如化合物ZXM．J-3，Z×M—J一10，Z×M．J．14，ZXM-J．15，ZXM—J-17，烈M-J一18。4、實驗結(jié)果表明在體外ZXM—A一1能夠抑4bJSK、QGY和SK-CyPJ腫瘤細胞的增復(fù)目大學生物學博十后流動站博士后出站報告CyPJ蛋白晶體結(jié)構(gòu)解析及】E抑制劑的篩選和鑒定殖，其IC50分別為40．44叩M、52．438土5．91叫M和70．571±0．76即M。關(guān)鍵詞：親和素J、肽酰脯氨酰順反異構(gòu)酶、三維結(jié)構(gòu)、小分子數(shù)據(jù)庫、分子相互
5、作用分析儀、半抑制濃度復(fù)旦大學生物學博士后流動站2博上后出站報告毋P】蛋白晶體結(jié)構(gòu)解析發(fā)其抑制劑的篩選和鑒定AbstractCyclophilinscompriseahighlyabundantfamilyofproteinsthatareexpressedineveryorganismstudiedtodate．Theyhavebeenshowntoactaspeptidyl-prolylc／s-transisomerasewhoseactivitycanbeinhibitedbyCsA．AnovelmembercyclophilinJinthisf
6、amilywascloned，expressedandpurified，thestructureofCyPJprotein。theinhibitorsofGyPJprotein，andthebiologicalfunctionofthoseinhibitorswasobtainedandanalyzed．(1)Thethree-dimensionalstructureofCyP．JhasbeendeterminedbymolecularreplacementusingtheCyPAstructureasthesearchmodelandhasbeenr
7、efinedat2．6Aresolution．TheCyPJmoleculecontainsfourhelicesandoneB—barrelcomposedofeightantiparallel8-strands．TheoversecondaryandtertiarystructuresofCyPJaresimilartothoseofCyPA，butCyPJcontainsanadditionaldisulfidebridgeandfoursegmentswithconformationsthatarestrikinglydifferentfrom
8、thoseofCyPA．His43andGin52ofCyPJareexpectedtobet
