豬免疫球蛋白A

《豬免疫球蛋白A》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。

1、豬免疫球蛋白A(IgA)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA)使用說(shuō)明書????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????【豬免疫球蛋白A(IgA)Elisa試劑盒試劑盒名稱】豬免疫球蛋白A(IgA)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA)【豬免疫球蛋白A(IgA)Elisa試劑盒試劑盒用途】定量檢測(cè)豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中免疫球蛋白A(IgA)的含量?！矩i免疫球蛋白A(IgA)Elisa試劑盒檢測(cè)原理

2、】本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入到預(yù)先包被豬免疫球蛋白A(IgA)單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結(jié)合的成分，再加入酶標(biāo)工作液，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B，底物(TMB)在辣根過(guò)氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中豬免疫球蛋白A(IgA)濃度呈正相關(guān)，450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值，計(jì)算樣本中豬免疫球蛋白A(IgA)含量。【豬免疫球蛋白A(IgA)Elisa試劑盒試劑盒組成】1酶標(biāo)包被板12孔×4條7顯色劑A液3mL

3、2標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL×6管8顯色劑B液3mL320倍濃縮洗滌液15mL9終止液3mL4樣本稀釋液3mL10說(shuō)明書1份5特殊稀釋液3mL11封板膜2張6酶標(biāo)試劑3mL12密封袋1個(gè)備注：標(biāo)準(zhǔn)品(1號(hào)→6號(hào))濃度依次為：80、40、20、10、5、2.5μg/mL.?【豬免疫球蛋白A(IgA)Elisa試劑盒需要而未提供的試劑和器材】1、37℃恒溫箱2、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀3、精密移液器及一次性吸頭4、蒸餾水5、一次性試管6、吸水紙【豬免疫球蛋白A(IgA)Elisa試劑盒操作步驟】1、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。3、

4、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍)；空白對(duì)照孔不加。4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書操作洗板)。6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL，空白對(duì)照孔不加。7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。8、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜

5、置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書操作洗板)。9、顯色：每孔先加入顯色劑A液50μL，再加入顯色劑B液50μL，平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s)，37℃避光顯色15min。10、終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11、測(cè)定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值(OD值)。12、計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。最終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋

6、倍數(shù)?！矩i免疫球蛋白A(IgA)Elisa試劑盒樣本要求】1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3)，因?yàn)榀B氮鈉(NaN3)是辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的抑制劑。2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3、樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒?！矩i免疫球蛋白A(IgA)Elisa試劑盒注意事項(xiàng)】1、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。2、酶標(biāo)包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè)，取平均值，以減小實(shí)驗(yàn)誤差。4、牢記樣

7、本已經(jīng)稀釋5倍，計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。5、本試劑盒定量范圍為2.5-80μg/mL，超過(guò)此范圍，為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得，不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果，請(qǐng)用特殊稀釋液稀釋后測(cè)定準(zhǔn)確結(jié)果(2.5-80μg/mL范圍內(nèi))，乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本最終濃度。6、若顯色過(guò)淺，可適當(dāng)延長(zhǎng)底物溫育時(shí)間。7、為避免交叉污染，標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照每加一個(gè)就要更換一次吸頭；酶標(biāo)工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復(fù)使用封板膜。8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號(hào)的試劑不得