血平板、TM平板操作規(guī)程.doc

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1、有明區(qū)慢彼病防修站檢臉科編號：QDFYJY?WS00Ll/0?2012章節(jié)：微生物實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程作業(yè)指導(dǎo)書標(biāo)題：血平板、TM平板操作規(guī)程頁碼：第1頁共3頁細(xì)菌室標(biāo)本.接種與培養(yǎng)方法操作規(guī)程1、標(biāo)本的接受1.1、標(biāo)本接受的時間：原則上全天任何時間均可。1.2、標(biāo)木的接受：接受標(biāo)本者耍認(rèn)真核對標(biāo)本的數(shù)量、標(biāo)本與檢驗(yàn)單要求是否相符以及標(biāo)本的質(zhì)量等。1.3、把接受的標(biāo)木編號。2、臨床標(biāo)本的接種2.1、檢驗(yàn)?zāi)康氖羌?xì)菌培養(yǎng)+藥敏試驗(yàn)。各臨床標(biāo)本的培養(yǎng)基選擇如下：2.1.1培養(yǎng)基的選擇標(biāo)本類型培養(yǎng)基血血培養(yǎng)瓶中段尿血平板、麥康凱平板腦脊

2、液血平板、巧克力平板穿刺液血平板、麥康凱平板膽汁血平板、麥康凱平板呼吸道標(biāo)本血平板、麥康凱平板糞便標(biāo)木SS平板分泌物血平板、麥康凱平板TM平板2.1.2、生殖器標(biāo)本根據(jù)臨床醫(yī)生所寫的檢驗(yàn)項(xiàng)目接種相應(yīng)的平板，操作如下：淋球菌培養(yǎng)接種淋球菌平板；念珠菌培養(yǎng)接種沙保羅培養(yǎng)基；支原體培養(yǎng)則按《支原體培養(yǎng)的操作規(guī)程》操作；作普通細(xì)菌培養(yǎng)，則接種血平板和巧克力平板；衣原體抗原檢測的按《衣原體抗原檢測的操作規(guī)程》進(jìn)行檢驗(yàn)。2.2、接種的方法：標(biāo)本做分區(qū)劃線。2.3、檢驗(yàn)?zāi)康臑檎铱顾釛U菌的按《找抗酸桿菌的操作規(guī)程》進(jìn)行檢驗(yàn)。3、所接種的平

3、板必須寫上標(biāo)本的編號和接種的口期，然后根據(jù)要求進(jìn)行培養(yǎng)。4、標(biāo)本的培養(yǎng)條件、溫度、時間平板培養(yǎng)條件、溫度、時間5、根據(jù)生長在平血平板孵箱、35--37°C、18—24小時板上的細(xì)菌菌落形態(tài)、巧克力平板孵箱、35--37笆、18—24小時菌落涂片、染色、鏡檢淋球菌平板孵箱、35—37°C、18—24小時等來綜合判斷細(xì)菌形沙保羅平板孵箱、28—31°C、24—36小時態(tài)和染色性質(zhì)，按各屬其他的平板孵箱、35—37°C、18—24小時鑒定的作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行各菌屬的常規(guī)鑒定及藥敏試驗(yàn)。6、結(jié)果的報告確認(rèn)細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)結(jié)果后，進(jìn)行

4、檢驗(yàn)驗(yàn)單結(jié)果報告的存盤、打印。7、對各類細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本除特殊要求外，我室一般操作完后按要求進(jìn)行無害化處理。一、細(xì)菌的接種根據(jù)待檢標(biāo)本的來源、培養(yǎng)目的及所用培養(yǎng)基的性狀，采用不同的接種方法。1、平板畫線分離法(1)、連續(xù)畫線分離法此法主要用于雜菌不多的標(biāo)本。用接種環(huán)取標(biāo)本少許，于平板1/5處密集涂布，然后回來作曲線連續(xù)劃線接種，線與線間有一定距離，劃滿平板為止。(2)、分區(qū)畫線分離法此法適用于雜菌較多的標(biāo)本。先將標(biāo)本均勻涂布于平板邊緣一小區(qū)(約占平板1/5),再在二、三區(qū)依次連續(xù)畫線，每畫線一區(qū)均將接種針滅菌一-次。每一區(qū)的劃

5、線均接觸上一2、斜面接種法該法主要用于單個菌落的純培養(yǎng)。用滅菌接種針取菌少許，從培養(yǎng)基斜而底部向上劃一直線，然后從底部向上作連續(xù)曲線畫線。一直畫到斜面頂端。3、液體接種法多用于一些液體生化試驗(yàn)管的接種。用滅菌接種環(huán)取菌少許，在試管內(nèi)壁與液面交接處的管壁上輕輕研磨，使細(xì)菌混合于液體中。二、細(xì)菌培養(yǎng)方法根據(jù)臨床初步診斷及待檢細(xì)菌的種類，可選用不同的環(huán)境進(jìn)行培養(yǎng)。常用的有需氧培養(yǎng)法、二氧化碳培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法。1、需氧培養(yǎng)法本法是臨床細(xì)菌室常用的培養(yǎng)方法，即將已經(jīng)接種好的平板、斜面和液體培養(yǎng)基等。置于35°C溫箱中孵育18?24

6、小時。2、二氧化碳培養(yǎng)法本室用CCh孵箱將已接種好的培養(yǎng)基置于CCh孵箱內(nèi)培養(yǎng)。三、分離及純化法3.1、分離是指從原材料或多種細(xì)菌的混合培養(yǎng)物中將各種細(xì)菌彼此獨(dú)立地分離開，以得到純的單一菌株，技術(shù)步驟如下：作純培養(yǎng)分離時，一般只用一只完整的瓊脂平板。涂劃多采用分區(qū)劃線法，在一只平板中町劃3?5個區(qū)。劃法有兩種：3.1.1、從臨床標(biāo)本分離細(xì)菌所含菌數(shù)相對較少時，可用接種環(huán)取標(biāo)本涂布在平板一角邊緣，然后從此區(qū)開始劃線至1/3平板，為第一區(qū)，再在2、3區(qū)依次劃線，每劃完一個區(qū)域均將接種環(huán)滅菌一次，冷卻后再劃下一區(qū)域，每一區(qū)域的劃

7、線均接觸上一區(qū)域的接種線1?2次，使菌量逐漸減少以獲得單個菌落。3.1.2、快速劃線分離法：采用快速劃線使一接種環(huán)標(biāo)本能分離出單個菌落，這與標(biāo)本的菌量及操作者的技能有很大關(guān)系。3.2、純化是指欲獲得大量純培養(yǎng)物的方法，所用平板大小可根據(jù)需要的菌量而定。方法是將一單個菌落或?qū)⑾嗤木渥鞔罅棵芗縿澯谄桨迳隙@得大量純的培養(yǎng)物。編寫人審核人批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期