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《實(shí)驗(yàn)三_藥物敏感試驗(yàn)和消毒滅菌.ppt》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、實(shí)驗(yàn)三消毒滅菌和藥敏試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和要求1.掌握藥敏試驗(yàn)的原理、步驟、結(jié)果及意義2.掌握常用的消毒與滅菌技術(shù)3.熟悉紫外線殺菌試驗(yàn)的原理4.了解細(xì)菌L型的誘導(dǎo)和菌落類型3一、藥敏試驗(yàn)在感染性疾病防治中的意義近年來，由于各種抗菌藥物的廣泛應(yīng)用，導(dǎo)致耐藥菌株的迅速增多。尤其是廣譜及超廣譜抗生素的普遍使用，造成耐藥菌株大量出現(xiàn)，給臨床治療帶來極大的困難。同時(shí)，由于不合理的使用抗生素，治療的失敗率及不良反應(yīng)均有增加。因此，藥敏試驗(yàn)在感染性疾病的防治方面具有日益重要的實(shí)際意義。4二.培養(yǎng)+藥敏的目的1、確定導(dǎo)致感染的病原菌的種類，對于不同的病原
2、菌（G-桿菌或G+球菌，條件致病菌或急性傳染病病原菌）需要采取不同的治療措施。2、確定病原菌對各種抗生素的敏感性，指導(dǎo)臨床根據(jù)病人情況合理用藥。由于細(xì)菌耐藥性的快速增長，單純依賴經(jīng)驗(yàn)選用藥物經(jīng)常無效，在更多的時(shí)候需要參考藥敏實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。3、用于流行病學(xué)調(diào)查及院內(nèi)感染的監(jiān)控，減少耐藥菌株的流行。5三、什么情況下需要做培養(yǎng)+藥敏？感染原因無法確定。病原菌的耐藥性無法確定，經(jīng)驗(yàn)用藥可能失?。ㄓ绕涫敲庖吡Φ拖禄颊?、長期使用抗生素者、ICU病房、院內(nèi)感染患者、接受導(dǎo)管插入或其他創(chuàng)傷性治療患者。）病人對可用藥物過敏，需要檢測其他藥物的耐藥性。病
3、人個(gè)體情況要求對某些藥物精確用藥，需要測定其最低抑菌濃度（MIC）。四、常用抗菌藥物敏感性試驗(yàn)與耐藥檢測方法介紹其原理：體外測定抗生素藥物抑菌或殺菌的能力。可幫助臨床對感染性疾病選擇最佳用藥，還可進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，了解某些致病菌耐藥性變異情況。紙片擴(kuò)散法（Kirby-Bauertest）稀釋法（dilutiontest）E試驗(yàn)法（Etest）聯(lián)合藥物敏感試驗(yàn)特殊耐藥菌及耐藥酶的表型檢測耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的檢測β-內(nèi)酰胺酶、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測等五、紙片擴(kuò)散法（K-B法）原理：含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測試菌的瓊脂平
4、板上，紙片所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后便不斷向紙片周圍區(qū)域擴(kuò)散，形成遞減的梯度濃度。在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的細(xì)菌生長被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對測試菌的最低抑制濃度（minimalinhibitoryconcentration，MIC）呈負(fù)相關(guān)，即抑菌圈愈大，MIC愈小。方法：菌液制備：挑取孵育16-24h的血平板上數(shù)個(gè)菌落置于生理鹽水管中，校正濃度至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)；涂布接種：無菌棉拭蘸取菌液，在試管壁旋轉(zhuǎn)擠去多余菌液后在MH瓊脂表面均勻涂布接種3次，每次旋轉(zhuǎn)平板60o，最后
5、沿平板內(nèi)緣涂抹1周；貼含藥紙片：平板在室溫下干燥3-5min，用無菌鑷子將含藥紙片緊貼于瓊脂表面，各紙片中心相距應(yīng)大于24mm，紙片距平板內(nèi)緣應(yīng)大于15mm；孵育：35oC16-18h，量取抑菌圈直徑。注意事項(xiàng)1紙片應(yīng)分布均勻，中心距離不小于24mm。2含菌平板必須避免過濃或過稀。3紙片貼完后應(yīng)在15min內(nèi)將平板反過來，置于37度溫箱中。4紙片一旦接觸培養(yǎng)基就不應(yīng)再挪動(dòng)位置。5要注意無菌操作。影響藥敏結(jié)果的因素培養(yǎng)基應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)菌的營養(yǎng)需要進(jìn)行配制。傾注平板時(shí)，厚度合適（約5-6mm），不可太薄，一般90mm直徑的培養(yǎng)皿，傾注培養(yǎng)基
6、18-20ml為宜。培養(yǎng)基內(nèi)應(yīng)盡量避免有抗菌藥物的拮抗物質(zhì)，如鈣、鎂離子能減低氨基糖苷類的抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和對氨苯甲酸（PABA）能拮抗磺胺藥和TMP的活性。細(xì)菌接種量細(xì)菌接種量應(yīng)恒定，如太多，抑菌圈變小，能產(chǎn)酶的菌株更可破壞藥物的抗菌活性。藥物濃度藥物的濃度和總量直接影響抑菌試驗(yàn)的結(jié)果，需精確配制。商品藥應(yīng)嚴(yán)格按照其推薦治療量配制。培養(yǎng)時(shí)間一般培養(yǎng)溫度和時(shí)間為37℃，8-18小時(shí)，有些抗菌藥擴(kuò)散慢如多粘菌素，可將已放好抗菌藥的平板培養(yǎng)基，先置4℃冰箱內(nèi)2~4小時(shí)，使抗菌藥預(yù)擴(kuò)散，然后再放37℃溫箱中培養(yǎng)，可以推遲細(xì)菌的生長，
7、而得到較大的抑菌圈。結(jié)果判讀：用刻度尺量取抑菌圈直徑，根據(jù)CLSI（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute）標(biāo)準(zhǔn)判讀結(jié)果；報(bào)告：細(xì)菌對該抗生素是敏感（susceptible，S）；耐藥（resistant，R）；還是中介（intermediate，I）。12六、如何理解MIC值及藥敏結(jié)果？每種藥物均提供定性和定量兩種結(jié)果。定性：敏感（S）表示該藥物對該細(xì)菌有抑制或殺滅作用。使用常規(guī)劑量可以達(dá)到有效的治療效果。中介（中度敏感，I）表示細(xì)菌對該藥物治療的敏感性低于敏感菌株，必須加大劑量以達(dá)到更高的
8、血藥濃度才能在特定的生理部位獲得有效的臨床效力；對于使用劑量有嚴(yán)格限制的藥物則必須重復(fù)測試以確定敏感還是耐藥。耐藥（R）表示藥物常規(guī)劑量所達(dá)到的藥物濃度不能抑制或殺死細(xì)菌，即使加大劑量也不能達(dá)到治療效果或者超過了人體的正常耐受水平。定
