高效液相色譜柱的保護(hù)

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1、高效液相色譜柱的保護(hù)1、最好用預(yù)柱。（但要注意，若有時(shí)出峰異常，要先看看是不是它有問題了）2、每次做完分析，都要進(jìn)行沖洗，分析用流動(dòng)相中若無酸、堿、鹽類物質(zhì)，建議用90％甲醇沖洗30～60min；若分析用流動(dòng)相中含以上物質(zhì)，要先用10％甲醇（或用與分析用流動(dòng)相同比例，把含酸、堿、鹽溶液換成水）沖洗1小時(shí)左右，再梯度走到90％甲醇沖洗30～60min（若用多元泵）。有必要時(shí)再循環(huán)幾次，可以適當(dāng)縮短時(shí)間。若長(zhǎng)時(shí)間不用該色譜柱，要沖洗好后，用純甲醇或乙腈封存。3、若流動(dòng)相中用到離子對(duì)試劑，更應(yīng)該好好沖洗，且該色

2、譜柱最好作為專用，不能再做其它物質(zhì)分析用。因色譜柱填料性質(zhì)已與原來所不同，在該柱上所摸索的色譜條件，可能在其它同類柱子上得不到重現(xiàn)。4、盡量避免反沖，除非該色譜柱廠家明確說明允許。5、普通C18柱盡量避免在40℃以上的溫度下分析。6、定期測(cè)柱效，有下降，可以用10％異丙醇甲醇沖洗色譜柱。若柱效還沒有改善，可以再生，甲醇－二氯甲烷－甲醇。--------------------------------------------------------------------------------1．樣品要采

3、用0.22或0.45μm濾膜過濾，流動(dòng)相采用0.45μm濾膜過濾并脫氣。2．大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2－7.5，盡量不超過該色譜柱的pH范圍3．避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化。4.避免純水沖洗反相色譜柱。5．每次測(cè)試完畢，要用20倍柱體積的流動(dòng)相沖洗色譜柱（分析色譜柱250×4.6mm柱體積3.2ml）。如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢后將柱子用純水沖洗干凈，并保存于乙腈中。6．壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號(hào)。避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化。是不是流動(dòng)相組成改變時(shí)要有個(gè)梯度,緩慢

4、升或緩慢降?那要多慢呢,比如說我用水和乙腈做流動(dòng)相,想從20:80升至100:0,設(shè)定多長(zhǎng)時(shí)間比較合適呢另外,純水沖反相柱的缺點(diǎn)是什么呀?--------------------------------------------------------------------------------說說防止色譜柱堵塞的問題吧：1：溶劑中的不溶物—應(yīng)使用色譜純?nèi)軇?，膜過濾（孔徑不超過0.45μm）2：樣品中的不溶物—應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行膜過濾（孔徑不超過0.45μm）3：泵，進(jìn)樣器等中的不溶物—在泵和進(jìn)樣器之間安裝內(nèi)

5、置過濾器，在進(jìn)樣器和柱之間安裝預(yù)過濾器4：柱內(nèi)不溶物的形成：由于溶劑的不互溶而產(chǎn)生的沉淀—用能溶解沉淀物的溶劑沖洗色譜柱；在不互溶溶劑中由于進(jìn)樣而產(chǎn)生的沉淀—檢查樣品液和流動(dòng)相是否互溶；由于溫度的改變或固定相的干涸而產(chǎn)生的沉淀—將色譜柱密封緊，并保持室溫恒定！還有就是平衡色譜柱、色譜柱的再生：1平衡色譜柱：反相色譜柱在經(jīng)過出廠測(cè)試后是保存在乙腈/水中的。請(qǐng)一定確保您所使用的流動(dòng)相和乙腈/水互溶。由于色譜柱在儲(chǔ)存或運(yùn)輸過程中可能會(huì)干掉，因此在用流動(dòng)相分析樣品之前，應(yīng)使用10－20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜

6、柱；如果您所使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水"過渡"?！　」枘z柱或極性色譜柱在經(jīng)過出廠測(cè)試后是保存在正庚烷中的。如果該色譜柱需要使用含水的流動(dòng)相，請(qǐng)?jiān)谑褂昧鲃?dòng)相之前用乙醇或異丙醇平衡如何平衡色譜柱？　　平衡過程中，將流速緩慢地提高；用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對(duì)試劑濃度如果較低，則需要較長(zhǎng)的時(shí)間來平衡）2色譜柱的再生：進(jìn)行色譜柱再生時(shí)，應(yīng)使用一個(gè)謙價(jià)的泵，最好不使用您的高效液相色譜儀上的泵。0.05M稀硫酸可以用來清洗已污染的色譜柱！----------------------

7、----------------------------------------------------------1.對(duì)于一些特殊型號(hào)的柱子，例如不同型號(hào)的手性柱應(yīng)嚴(yán)格按照柱子的相應(yīng)說明書所要求的進(jìn)行維護(hù)，并按照其規(guī)定的范圍選擇試劑的種類，比例，PH，等等；2.盡量避免柱子進(jìn)氣泡的現(xiàn)象出現(xiàn)，如在實(shí)驗(yàn)過程中留心流動(dòng)相的體積，同時(shí)對(duì)所需體積進(jìn)行大概的估計(jì)，以免吸空，氣泡進(jìn)柱，盡管有多種排氣泡的方法，但畢竟影響柱子的性能，尤其是比較“嬌貴”的柱子；-------------------------------

8、-------------------------------------------------每天用足夠的時(shí)間來平衡色譜柱，您就會(huì)在處理問題方面獲得最大的"補(bǔ)償"，而且您的色譜柱的壽命也會(huì)變得更長(zhǎng)！------一定得做！　　新的色譜柱在使用之前應(yīng)該在您自己的液相色譜儀上進(jìn)行性能測(cè)試，即使用色譜柱附帶的檢驗(yàn)報(bào)告上測(cè)試條件和樣品來測(cè)定該色譜柱的柱效。并且，在以后的使用中，應(yīng)時(shí)常對(duì)色譜柱進(jìn)行測(cè)試?？ㄌ字陌惭b（加預(yù)柱）更換色譜柱