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1、熱處理增強(qiáng)黃芩抗炎作用，抵抗脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷中NF-κB信號(hào)通路的影響摘要：本研究主要探討經(jīng)熱處理黃芩是否能改善脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷，用160°C加熱處理過(guò)的黃芩（HSR）與無(wú)熱處理黃芩（NSR）進(jìn)行比較。脂多糖處理組小鼠體重顯著減低，肺重量明顯增加，然而，NSR或者HSR均能夠改善小鼠身體和肺的重量。HSR能明顯降低小鼠血清和肺組織中的氧化應(yīng)激和炎癥標(biāo)志物水平。HSR和NSR均能明顯降低超氧化物歧化酶和增加過(guò)氧化氫酶的水平。用HSR和NSR處理小鼠影響的氧化應(yīng)激和炎癥均可顯著改善，通過(guò)抑
2、制NF-κB的降解去調(diào)整抑制炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子的表達(dá)。同時(shí)，與NSR相比，HSR處理小鼠肺組織學(xué)的改變被明顯抑制。總體來(lái)說(shuō)，HSR的改善效果優(yōu)于NSR。HSR與NSR相比較，HSR中代表性的黃酮類成分如黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素含量更高。這些數(shù)據(jù)揭示了熱加工黃芩可能作為關(guān)鍵因素參與LPS引起的肺功能障礙的改善。1、介紹急性肺損傷，是一種以急性呼吸衰竭，肺血管通透性增高，肺水腫，中性粒細(xì)胞遷移過(guò)度，促炎性細(xì)胞因子和介質(zhì)的釋放為特征的一種疾病。他能導(dǎo)致顯著的發(fā)病率和死亡率。急性肺損傷的病因是嚴(yán)重的低氧血癥，白細(xì)
3、胞浸潤(rùn)，雙側(cè)肺水腫，肺炎和創(chuàng)傷。尤其是美國(guó)，急性肺損傷的發(fā)病率很高，每年大約有200000個(gè)新發(fā)病例。因此，治療急性肺損傷需要高度有效的藥物和治療方法。脂多糖（LPS）是革蘭陰性菌外膜的主要成分，普遍用于實(shí)驗(yàn)性肺損傷模型。據(jù)報(bào)道，脂多糖能激活巨噬細(xì)胞產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子和介質(zhì)。此外，他還能促進(jìn)活性氧（ROS）的生成，比如超氧歧化物（O2?）、過(guò)氧化氫（H2O2）和巨噬細(xì)胞中的羥基自由基。一氧化氮（NO）誘導(dǎo)LPSchallenge是一種有效的炎癥介子，與O2-反應(yīng)產(chǎn)生過(guò)氧亞硝基陰離子（ONOO-）。ONOO-
4、與細(xì)胞的死亡和肺損傷有密切的聯(lián)系。過(guò)量生產(chǎn)的活性氧抑制先天的抗氧化系統(tǒng)。因此，氧化劑/抗氧化系統(tǒng)變得不平衡。黃芩（ScutellariabaicalensisGeorgi）在中國(guó)、日本和韓國(guó)已被用來(lái)治療發(fā)燒，腹瀉，黃疸，高血壓，細(xì)菌和病毒感染等疾病。傳統(tǒng)上，中藥是具有活性成分的復(fù)雜的混合物組成的，并且一些藥材進(jìn)過(guò)熱處理來(lái)提高藥物的治療效果，比如空氣干燥，蒸，烤，烘焙等方式。這些加工方法通過(guò)改變其中的化學(xué)成分來(lái)增加它們的生物活性，同時(shí)通過(guò)增加總多酚含量，包括黃酮類化合物，提高了生物活性物質(zhì)含量。然而，關(guān)于黃
5、芩加熱處理后化學(xué)成分和生物活性變化的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，我們測(cè)定了未經(jīng)加熱和經(jīng)過(guò)加熱兩種黃芩中，黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素三種黃酮的含量，并且用脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷模型評(píng)價(jià)這些規(guī)格黃芩的抗炎活性。2、材料與方法2.1材料。LPS從大腸桿菌0127:B8制劑（純度>99%，由疏水性的基質(zhì)組成，（脂質(zhì)A具有分子毒性），一個(gè)親水性多糖鏈核和親水oantigenic多糖側(cè)鏈）獲得，苯甲基磺酰氟（PMSF）和二硫蘇糖醇（DTT）購(gòu)買自Sigma公司（St.Louis,MO,USA）。蛋白酶抑制劑混合物和乙二胺
6、四乙酸（EDTA）購(gòu)自WakoPure化學(xué)公司（Osaka，Japan）。2',7'-二氯熒光素二乙酸酯（DCFH-DA）自MolecularProbes（Eugene,OR,USA）獲得。ECLWesternblotting檢測(cè)試劑和純硝酸纖維素膜購(gòu)自通用醫(yī)療（Buckinghamshire，UK）。(NF-?B)p65,NF-?B(I?B)?,I?B?抑制劑,小鼠單克隆抗體的環(huán)氧化酶-2（COX-2），誘導(dǎo)的硝酸氧化物合成酶（iNOS）,單核細(xì)胞趨化因子-1（MCP-1）,細(xì)胞間粘附分子-1（ICAM
7、-1）,腫瘤壞死因子?（TNF-?）,白細(xì)胞介素-6(IL-6),超氧（化）物歧化酶（SOD）,過(guò)氧化氫酶,?-肌動(dòng)蛋白，組蛋白,and羊抗兔和羊抗鼠抗體-過(guò)氧化物酶-（HRP-）共軛二次抗體購(gòu)自SantaCruzBiotechnology公司(SantaCruz,CA,USA)。實(shí)驗(yàn)溶劑如乙腈，甲醇，醋酸，甲酸和水等色譜（HPLC）級(jí)溶劑購(gòu)自Merck（Darmstadt，Germany）。標(biāo)準(zhǔn)品黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素購(gòu)自Wako純化學(xué)公司（Osaka，Japan）。2.2植物材料和加熱處理黃芩購(gòu)自O(shè)
8、minherb公司（Youngcheon，Korea）。植物干燥標(biāo)本保存在HerbariumofDaeguHaanyUniversity并且由S.S.Roh教授鑒定。干黃芩片用焙燒機(jī)在160°C（內(nèi)部溫度）處理7min后，粉碎，室溫下60Hz超聲波提取3小時(shí)，溶劑用真空蒸發(fā)器濃縮至原黃芩重量的22.4%即可。不加熱處理黃芩也采取同樣的粉碎方法和提取方法，最后濃縮至22.8%。2.3黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素分析取樣品70%乙醇提
