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《大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞不同體外培養(yǎng)方法對(duì)gfap表達(dá)的影響》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞不同體外培養(yǎng)方法對(duì)GFAP表達(dá)的影響 【摘要】目的:比較體外培養(yǎng)純化星形膠質(zhì)細(xì)胞的不同方法對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞影響,為進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。方法:原代培養(yǎng)后分別經(jīng)振蕩純化、傳代純化的方法培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞。結(jié)果:原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞純度不高;經(jīng)振蕩純化后GFAP表達(dá)量明顯增多,GFAP免疫熒光變亮;經(jīng)傳代純化培養(yǎng)后純度達(dá)到97%,GFAP表達(dá)量較少。結(jié)論:經(jīng)過傳代純化的星形膠質(zhì)細(xì)胞純度較高,GFAP表達(dá)量較少,因此能更好地反映其在腦中的功能,是研究星形膠質(zhì)細(xì)胞在腦中的功能較好的培養(yǎng)方法?!娟P(guān)鍵詞】星形膠質(zhì)細(xì)胞;體外培養(yǎng);膠質(zhì)纖維酸性蛋白【中圖分類號(hào)】R-311【文
2、獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1004-7484(2014)06-3494-01【Abstract】Objective:ComparingdifferentwaysofisolationandpurifyastrocytesfrommousecerebraltissuetoLearntheeffectofastrocytesforfuturestudyoftheirfunctionsinthebrain.Methods:Toacquirepurifiedastrocytesbytwousuallyusedculturalmethods:afterprimaryculture,7subcu
3、ltureforthreetimesorshankenovernighttwice.Results:Thepurityofprimaryculturewasthelowest,withthemethodofbeingshankenovernighttwicehighlyexpressedGFAP,Immunofluorescencestainingwithanti-mouseGFAPwasbrighter.Astrocytespurifiedbybeingsubculturedforthreetimesover97%purity.TheexpressionofbyGFAPlow.C
4、onclusion:Withthesubculturalmethodwecanacquirethepurerastrocytesinvitro,whichtheexpressionofbyGFAPlower,andcanbestreflecttheirfunctionsinthebrain.It’sanoptimalmethodtoacquiretheastrocytesforfuturestudyoftheirfunctionsinvivo.【Keywords】astrocyte;invitro;glialfibrillaryacidicprotein7反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞及星形膠
5、質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元的關(guān)系一直以來都是神經(jīng)科學(xué)界關(guān)注的熱門課題[1],體外分離純化星形膠質(zhì)細(xì)胞己有三十余年的歷史,為眾多研究提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),也大大促進(jìn)了對(duì)Ast的特性研究。雖然獲取星形膠質(zhì)細(xì)胞的方法較多,但一般研究偏重星形膠質(zhì)細(xì)胞的純度而較少關(guān)注其生物學(xué)特性。而不同的體外培養(yǎng)方法可能影響Ast活化,表現(xiàn)為GFAP不同程度的表達(dá),進(jìn)而可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,本研究將文獻(xiàn)常報(bào)道的兩種方法進(jìn)行比較,觀察不同試驗(yàn)方法對(duì)GFAP表達(dá)影響,從而獲得一種純度既高,又能滿足不同實(shí)驗(yàn)要求的星形膠質(zhì)細(xì)胞純化方法。1材料與方法1.1材料SD乳鼠(泰山醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心);DMEM/F12粉劑(Gibco產(chǎn)品);兔抗
6、人GFAP多克隆抗體(北京中杉金橋);Cy3標(biāo)記抗兔IgG免疫熒光試劑盒(碧云天生物技術(shù)研究所);細(xì)胞核染色劑DAPI(碧云天生物技術(shù)研究所);Image-proplus4.0圖像分析系統(tǒng)(IPP公司)。1.2方法1.2.1星形膠質(zhì)細(xì)胞純化培養(yǎng)選用SPF級(jí)、出生時(shí)間不超過48h的健康SD乳鼠,75%乙醇浸泡消毒后,處死、取出大腦移入含有預(yù)冷的D-Hank’s液培養(yǎng)皿中,洗滌并去除腦膜,夾取少許大腦皮層組織D-Hank’s液中洗滌、剪碎,0.125%胰蛋白酶消化后終止,過濾、離心,棄上清,重新加入培養(yǎng)基,制成單細(xì)胞懸液,接種到培養(yǎng)瓶中,差速粘附處理2次。再次制成單細(xì)胞懸液,接種至預(yù)先
7、用多聚賴氨酸包被過的培養(yǎng)瓶中,37℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),7~9d后,細(xì)胞已80%~90%融合,進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1.2.2傳代培養(yǎng)時(shí)按以下兩種方法進(jìn)行星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng):(1)培養(yǎng)10~12d,在搖床上以180r/min振蕩過夜一次(DMEM基培,37°C,18h),7隔天再以同樣的方法振蕩第二次,此為“振蕩純化”;以后每4d傳一代(不再做震蕩純化),共傳三次,每次傳代不做差速貼壁,實(shí)驗(yàn)取傳三代(即第四代)的星形膠質(zhì)細(xì)胞,終密度為1×106/ml左右,于傳代后7d進(jìn)行實(shí)