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《大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞不同體外培養(yǎng)方法對(duì)gfap表達(dá)的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞不同體外培養(yǎng)方法對(duì)GFAP表達(dá)的影響 【摘要】目的：比較體外培養(yǎng)純化星形膠質(zhì)細(xì)胞的不同方法對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞影響，為進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。方法：原代培養(yǎng)后分別經(jīng)振蕩純化、傳代純化的方法培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞。結(jié)果：原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞純度不高；經(jīng)振蕩純化后GFAP表達(dá)量明顯增多，GFAP免疫熒光變亮；經(jīng)傳代純化培養(yǎng)后純度達(dá)到97%，GFAP表達(dá)量較少。結(jié)論：經(jīng)過傳代純化的星形膠質(zhì)細(xì)胞純度較高，GFAP表達(dá)量較少，因此能更好地反映其在腦中的功能，是研究星形膠質(zhì)細(xì)胞在腦中的功能較好的培養(yǎng)方法?！娟P(guān)鍵詞】星形膠質(zhì)細(xì)胞；體外培養(yǎng)；膠質(zhì)纖維酸性蛋白【中圖分類號(hào)】R-311【文
2、獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1004-7484（2014）06-3494-01【Abstract】Objective：ComparingdifferentwaysofisolationandpurifyastrocytesfrommousecerebraltissuetoLearntheeffectofastrocytesforfuturestudyoftheirfunctionsinthebrain.Methods：Toacquirepurifiedastrocytesbytwousuallyusedculturalmethods：afterprimaryculture，7subcu
3、ltureforthreetimesorshankenovernighttwice.Results：Thepurityofprimaryculturewasthelowest，withthemethodofbeingshankenovernighttwicehighlyexpressedGFAP，Immunofluorescencestainingwithanti-mouseGFAPwasbrighter.Astrocytespurifiedbybeingsubculturedforthreetimesover97%purity.TheexpressionofbyGFAPlow.C
4、onclusion：Withthesubculturalmethodwecanacquirethepurerastrocytesinvitro，whichtheexpressionofbyGFAPlower，andcanbestreflecttheirfunctionsinthebrain.It’sanoptimalmethodtoacquiretheastrocytesforfuturestudyoftheirfunctionsinvivo.【Keywords】astrocyte；invitro；glialfibrillaryacidicprotein7反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞及星形膠
5、質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元的關(guān)系一直以來都是神經(jīng)科學(xué)界關(guān)注的熱門課題[1]，體外分離純化星形膠質(zhì)細(xì)胞己有三十余年的歷史，為眾多研究提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，也大大促進(jìn)了對(duì)Ast的特性研究。雖然獲取星形膠質(zhì)細(xì)胞的方法較多，但一般研究偏重星形膠質(zhì)細(xì)胞的純度而較少關(guān)注其生物學(xué)特性。而不同的體外培養(yǎng)方法可能影響Ast活化，表現(xiàn)為GFAP不同程度的表達(dá)，進(jìn)而可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本研究將文獻(xiàn)常報(bào)道的兩種方法進(jìn)行比較，觀察不同試驗(yàn)方法對(duì)GFAP表達(dá)影響，從而獲得一種純度既高，又能滿足不同實(shí)驗(yàn)要求的星形膠質(zhì)細(xì)胞純化方法。1材料與方法1.1材料SD乳鼠（泰山醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）；DMEM/F12粉劑（Gibco產(chǎn)品）；兔抗
6、人GFAP多克隆抗體（北京中杉金橋）；Cy3標(biāo)記抗兔IgG免疫熒光試劑盒（碧云天生物技術(shù)研究所）；細(xì)胞核染色劑DAPI（碧云天生物技術(shù)研究所）；Image-proplus4.0圖像分析系統(tǒng)（IPP公司）。1.2方法1.2.1星形膠質(zhì)細(xì)胞純化培養(yǎng)選用SPF級(jí)、出生時(shí)間不超過48h的健康SD乳鼠，75%乙醇浸泡消毒后，處死、取出大腦移入含有預(yù)冷的D-Hank’s液培養(yǎng)皿中，洗滌并去除腦膜，夾取少許大腦皮層組織D-Hank’s液中洗滌、剪碎，0.125%胰蛋白酶消化后終止，過濾、離心，棄上清，重新加入培養(yǎng)基，制成單細(xì)胞懸液，接種到培養(yǎng)瓶中，差速粘附處理2次。再次制成單細(xì)胞懸液，接種至預(yù)先
7、用多聚賴氨酸包被過的培養(yǎng)瓶中，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，7～9d后，細(xì)胞已80%～90%融合，進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1.2.2傳代培養(yǎng)時(shí)按以下兩種方法進(jìn)行星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)：（1）培養(yǎng)10～12d，在搖床上以180r/min振蕩過夜一次（DMEM基培，37°C，18h），7隔天再以同樣的方法振蕩第二次，此為“振蕩純化”；以后每4d傳一代（不再做震蕩純化），共傳三次，每次傳代不做差速貼壁，實(shí)驗(yàn)取傳三代（即第四代）的星形膠質(zhì)細(xì)胞，終密度為1×106/ml左右，于傳代后7d進(jìn)行實(shí)
