小鼠巨噬細(xì)胞功能的檢測(cè)

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1、分子免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告（一）2005.12.28小鼠巨噬細(xì)胞功能的檢測(cè)伍國(guó)強(qiáng)（蘭州大學(xué)草業(yè)學(xué)院蘭州730020）摘要：本實(shí)驗(yàn)用CFA免疫小鼠后，檢測(cè)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的數(shù)目以及用中性紅檢測(cè)巨噬細(xì)胞的吞噬能力。結(jié)果表明，免疫小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞的數(shù)目和吞噬能力均有所提高。關(guān)鍵詞：巨噬細(xì)胞；功能；檢測(cè)1前言巨噬細(xì)胞是一種多功能免疫細(xì)胞,在機(jī)體的特異性和非特異性免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要功能。主要作用有：（1）吞噬殺傷作用：直接吞噬、調(diào)理吞噬作用。（2）抗原提呈作用：即外來的抗原性異物通過巨噬細(xì)胞的捕獲、加工和處理后，與胞內(nèi)合成的MHC-1/II類分子形成抗原肽－MHC分子復(fù)合物，并被

2、呈遞到細(xì)胞膜表面，被TCR識(shí)別的作用。具有此作用的細(xì)胞叫抗原呈遞細(xì)胞（antigenpresentingcell,APC)。此外，巨噬細(xì)胞表面還表達(dá)多種共刺激分子，如B7、ICAM-1、LFA-1,3等分別與T細(xì)胞上的CD28、LFA-1(CD11)、LFA-2(CD2)等相互作用，為T細(xì)胞的活化提供第二信號(hào)。（3）抗腫瘤作用：Mf被某些細(xì)胞因子如IFN-g激活后能有效殺傷腫瘤等靶細(xì)胞，其吞噬殺菌能力也顯著提高。（4）分泌生物活性介質(zhì)，產(chǎn)生免疫應(yīng)答和其它免疫效應(yīng)：如IL-1,12、IFN、TNF、PGE等;以及某些補(bǔ)體成份和凝血因子、組織修復(fù)因子等。為了檢測(cè)巨噬細(xì)

3、胞的吞噬功能，我們用CFA免疫的小白鼠作為實(shí)驗(yàn)材料檢測(cè)其腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的作用。2材料與方法2．1材料2．1．1藥品：生理鹽水、0.6%環(huán)磷酰胺、Hank’s溶液、1640培養(yǎng)基、細(xì)胞裂解液、中性紅等。2．1．2儀器：血球計(jì)數(shù)板、細(xì)胞培養(yǎng)箱、分光光度計(jì)等。2．1．3動(dòng)物：小白鼠2只，由蘭大醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。2.2、方法2．2．1小鼠腹腔巨噬細(xì)胞制備取小白鼠2只，分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組注射0.1ml生理鹽水，試驗(yàn)組注射0.1mlcFA。48小時(shí)后，小鼠眼眶放血，斷頸處死。腹腔注射3ml預(yù)冷的生理鹽水。吸取腹腔滲出液5ml離心管（冰?。?。1600rpm

4、離心10分鐘，棄上清，4℃生理鹽水定容至5ml。血球計(jì)數(shù)板鏡下巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)。用生理鹽水調(diào)mΦ濃度為1×106，取4ml1600rpm離心10分鐘，棄上清加4ml1640定懸。將mΦ加入24孔板，每組4孔，每孔1ml。37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱貼壁培養(yǎng)純化2小時(shí)。2．2．2巨噬細(xì)胞吞噬中性紅試驗(yàn)將貼壁純化好的mΦ棄1640培養(yǎng)液，對(duì)照孔加0.5ml生理鹽水，其余每孔加0.5ml0.075%中性紅,繼續(xù)培養(yǎng)1小時(shí)。傾去上清液,用溫PBS洗細(xì)胞3次,每孔加入細(xì)胞溶解液(為體積分?jǐn)?shù)50%的乙酸和體積分?jǐn)?shù)50%的無水乙醇)2ml,室溫下放置30分鐘,待細(xì)胞溶解后,即用分光

5、光度計(jì)測(cè)定OD值。以O(shè)D值表示巨噬細(xì)胞功能的強(qiáng)弱。3結(jié)果與討論表：mΦ的濃度及吸光值　mΦ細(xì)胞個(gè)數(shù)mΦ濃度（個(gè)/ml)0D值對(duì)照組2566.4×1050.252試驗(yàn)組21765.44×1060.2833．1免疫小鼠腹腔巨噬細(xì)胞濃度從上表可以看出，2分子免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告（一）2005.12.28用cFA免疫的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞濃度較對(duì)照大，說明了CFA可以刺激巨噬細(xì)胞的大量產(chǎn)生。3．2免疫小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能增從上表可以看出，試驗(yàn)組的OD值較對(duì)照高，說明了免疫小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬能力增強(qiáng)了。2