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《苦參藥材中4種生物堿的含量測定論文》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、苦參藥材中4種生物堿的含量測定論文劉倩,劉永剛,鄭玉勝,張宏桂【關(guān)鍵詞】苦參;,,生物堿;,,,高效液相色譜摘要:目的建立反相液相色譜法測定苦參藥材中4種生物堿的含量測定方法。方法使用hypersilBDS(150mm×4.6mm,5μm)色譜柱,流動相為甲醇-0.1%氨水梯度洗脫,檢測波長210nm。結(jié)果苦參堿在0.25~2.00μg(r=0.9997),槐定堿在0.28~2.24μg(r=0.9995).freelinationof4KindsofAlkaloidsinSophoraflavescensAit.byHPLCAbstract:ObjectiveT
2、odevelopanHPLCmethodtodeterminethecontentof4alkaloidsinSophoraflavescensAit.MethodsHypersilBDS(150mm×4.6mm,5um)phasecolumnobilephasemethanol-0.1%ammoniaination.ResultsThelinearconcentrationrangeofmatrine、sophoridine、oxymatrineandoxysophocarpineethodissimple,rapid,sensitive,specific,an
3、dcanbeusedfordeterminationofthecontentofalkaloidsinSophoraflavescensAitKeystationRevA0.803色譜工作站。1.2試藥苦參堿對照品(批號110805-200306),氧化苦參堿對照品(批號110780-200405),槐定堿對照品(批號110784-200303),氧化槐果堿(批號111652-200301)均購自中國藥品生物制品鑒定所,甲醇(色譜純),氨水(分析純),水為二蒸水。3種產(chǎn)地的苦參藥材,經(jīng)鑒定為豆科植物苦參的干燥根。2方法2.1提取條件的選擇精密稱取苦參粉末(40目)
4、0.5g,置具塞錐形瓶中,加濃氨試液0.6ml,氯仿30ml,超聲30min,濾過,揮干,殘渣加甲醇溶解,定容于100ml容量瓶中,搖勻,過0.45um微孔濾膜,取續(xù)濾液作為供試品溶液1。精密稱取苦參粉末(40目)0.5g,加入30ml甲醇(pH=5),超聲30min,濾過,濾液揮干,殘渣加水10ml溶解,加氨水1ml,氯仿萃取3次,合并氯仿液,揮干,加甲醇溶解,定容于100ml容量瓶中,搖勻,過0.45μm微孔濾膜,取續(xù)濾液作為供試品溶液2。結(jié)果表明供試品溶液1的各生物堿濃度均明顯高于供試品溶液2,故選擇前者進(jìn)行提取。2.2對照品溶液的制備精密稱取苦參堿,氧化苦
5、參堿,槐定堿,氧化槐果堿對照品10mg,加甲醇溶解,定容于100ml,制成苦參堿、氧化苦參堿、槐定堿、氧化槐果堿混合儲備液。2.3色譜條件及分析方法色譜柱:HypersilBDS(150mm×4.6mm,5μm);流動相:A:0.1%氨水,B:甲醇;梯度洗脫:0.01min:A:B(80:20),30min:A:B(60:40),50min:A:B(80:20),記錄時間:60min;流速:0.5ml/min;柱溫:25℃;檢測波長:327nm。進(jìn)樣量:10μl。2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線依次精密吸取儲備液1,2,4,6,8ml,置10ml容量瓶中,甲醇稀釋至刻度,搖勻,分別
6、吸取20μl進(jìn)樣,以峰面積為橫坐標(biāo),進(jìn)樣量(μg)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見表1。表1標(biāo)準(zhǔn)曲線(略)2.5精密度實驗精密度實驗取同一供試品溶液,重復(fù)進(jìn)樣6次,計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差,則苦參堿、槐定堿、氧化苦參堿、氧化槐果堿RSD分別為0.821%,0.958%,1.081%,0.924%。2.6重現(xiàn)性實驗取同一苦參藥材5份制備供試品溶液,按[含量測定]項下的方法測定苦參堿、槐定堿、氧化苦參堿、氧化槐果堿的含量,苦參堿、槐定堿、氧化苦參堿、氧化槐果堿的RSD分別為1.201%,1.417%,1.776%,1.358%。2.7穩(wěn)定性考察分別取放置4,8,12,16,20,
7、24h的供試品溶液,測定4種生物堿的含量,以考察其穩(wěn)定性。RSD值為1.617%,表明供試品溶液至少在24h內(nèi)穩(wěn)定。2.8加樣回收率精密稱取苦參堿、氧化苦參堿、槐定堿、氧化槐果堿對照品適量,加入到一定量已知苦參堿、氧化苦參堿、槐定堿、氧化槐果堿含量的苦參粉末中,制備供試品溶液,按樣品測定方法進(jìn)行測定,代入回歸方程計算平均回收率分別為99.24%,98.31%,101.28%,100.59%,RSD分別為1.248%,1.517%,1.412%,1.638%。2.9樣品測定取3種產(chǎn)地苦參藥材制備成供試品溶液,注入液相色譜儀,外標(biāo)法側(cè)得苦參中苦參堿,槐定堿,氧化苦參堿
8、,氧化槐果