六君子湯對環(huán)磷酰胺的增效減毒作用研究論文

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1、六君子湯對環(huán)磷酰胺的增效減毒作用研究論文劉智勤，朱惠學(xué)，陳鵲汀蔣玉鳳，孫宏麗，黃啟福【摘要】目的探討六君子湯對環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide，CTX）的增效減毒作用。方法建立S180荷瘤小鼠模型后，隨機(jī)分為4組，即荷瘤對照組、CTX組、六君子湯高劑量+CTX組、六君子湯低劑量+CTX組.freelidum(CTX)activitiesbyLiuJunZiDecoction.MethodsS180tumorbearingmicemodelslyintofourgroups，includingcontrolg

2、roupor，CTXgroup，LiuJunZiDecoction(highandloice.After10daysoftreatment，themiceinthefourgroupsormunefunctionandantioxidativeenzymeeasuredrespectively.ResultsLiuJunZiDecoctioncouldpromotespleenlymthocyteproliferation，NKactivityandincreasetumor-proveimmunefunctiona

3、ndanti-oxidativecapacity.Keyide；SynergyandAttenuation；TumorChemotherapy腫瘤是目前嚴(yán)重危害人類生命健康的常見病。當(dāng)前對腫瘤的治療仍是以手術(shù)為主的綜合治療，其中術(shù)后化療是預(yù)防轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的重要治療手段，然而化療常引起如臟器損害和免疫力低下等毒副反應(yīng)，使患者難以堅持治療。近年來的研究顯示，中醫(yī)藥在支持患者完成化療療程、增強(qiáng)療效、防止毒副反應(yīng)上有著重要的作用，臨床運用廣泛。六君子湯源自《婦人良方》，主治脾胃氣虛兼有痰濕，癥見惡心嘔吐、胸脘痞悶、四肢無力等癥

4、狀，其所治療諸癥恰恰為化療中常見，但六君子湯在腫瘤化療中的增效減毒作用報道較少，且缺乏系統(tǒng)性和規(guī)范性。本研究通過建立S180荷瘤小鼠模型，探討六君子湯聯(lián)合化療藥物環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide，CTX）治療腫瘤是否具有減毒增效作用，以期為該方的臨床應(yīng)用提供一定實驗依據(jù)。1材料與儀器1.1動物和瘤株清潔級昆明小鼠40只，8~10周齡，雌雄各半，體重18~22g，由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，合格證編號704113。動物在實驗前適應(yīng)性馴養(yǎng)1周。飼料和墊料由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。實驗期間自由采食飲水。

5、腹水型S180瘤株由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，L929細(xì)胞株由北京市中醫(yī)研究所提供。1.2藥物六君子湯主要由人參、白術(shù)、茯苓、甘草、陳皮、半夏等藥物組成，由河北大學(xué)附屬醫(yī)院中藥房提供，所有藥品均經(jīng)中藥專家鑒定。取上述中藥自來水浸泡1h后，分別加8，6，4倍量的水煎煮3次，時間分別為藥液熬開后40，30，20min，將3次煎煮的藥液混合，離心，取上清，80℃水浴濃縮至每毫升含生藥0.8g，高溫消毒后置4℃冰箱保存?zhèn)溆??；熕幬餅樽⑸溆铆h(huán)磷酰胺（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號06112021)。1.3試劑RpMI1

6、640完全培養(yǎng)基(Amresco公司產(chǎn)品)，四氮甲唑藍(lán)(MTT，Amresco公司產(chǎn)品)，DMSO(Amresco公司產(chǎn)品)，刀豆蛋白A(ConA，Sigma公司產(chǎn)品)。超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPx)測試盒(南京建成生物工程研究所)。1.4儀器酶標(biāo)分析儀（北京普朗新技術(shù)有限公司產(chǎn)品），CO2培養(yǎng)箱（上海?，攲嶒炘O(shè)備有限公司產(chǎn)品），超凈工作臺(蘇凈集團(tuán)，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司產(chǎn)品)，倒置顯微鏡（南京江南永新光學(xué)有限公司產(chǎn)品）。AE240電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公

7、司產(chǎn)品）。22pC分光光度計（上海棱光技術(shù)有限公司產(chǎn)品）。2方法2.1動物模型的建立［1］無菌條件下抽取傳代第8天的S180小鼠的腹水，按1:3比例用生理鹽水稀釋，反復(fù)沖打、充分混勻，在顯微鏡下計數(shù)，用生理鹽水調(diào)整細(xì)胞濃度為1×107/ml，取0.2ml于每鼠右側(cè)腋窩下碘酊消毒后皮下接種。瘤株接種前，均用0.2%臺盼藍(lán)染色，計算活細(xì)胞數(shù)為95%~98%。從抽取腹水時開始，到移植完最后一只小鼠的總時間控制在60min內(nèi)。2.2分組及給藥小鼠接種24h后按體重和性別隨機(jī)分成荷瘤對照組、CTX組、六君子湯（高、低劑量）+C

8、TX組。荷瘤對照組用生理鹽水灌胃，CTX組腹腔注射CTX0.02g·kg-1·d-1，同時用生理鹽水灌胃，六君子湯高、低劑量+CTX組的化療藥物劑量、給藥途徑及時間與CTX組相同，六君子湯高、低劑量分別給予16，4g·kg-1·d-1（按生藥量計算，劑量由預(yù)實驗得出）灌胃，各組灌胃容積均為0.2m1/10g，1次/d，連續(xù)10d。各組于瘤細(xì)胞接