黃芪總苷對脾虛大鼠壁細(xì)胞胃泌素受體作用的研究論文

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1、黃芪總苷對脾虛大鼠壁細(xì)胞胃泌素受體作用的研究論文黃可兒李燕舞王汝俊王建華【關(guān)鍵詞】黃芪總苷／藥理學(xué)；,,受體,胃腸激素；,,脾虛；,,疾病模型,動物；,,大鼠摘要：【目的】觀察黃芪總苷(AST)對脾虛大鼠胃壁細(xì)胞胃泌素受體結(jié)合位點(diǎn)數(shù)變化的調(diào)控作用?！痉椒ā縎D大鼠采用胃飼大黃液(10?g/kg)方法復(fù)制脾虛模型；采用LeL脾虛模型大鼠胃壁細(xì)胞懸液中加入AST20?μＬ體外孵育，并設(shè)正常對照組與模型組；采用放射配基結(jié)合法檢測壁細(xì)胞胃泌素受體結(jié)合位點(diǎn)數(shù)?！窘Y(jié)果】模型組壁細(xì)胞胃泌素受體結(jié)合位點(diǎn)數(shù)下降，

2、與正常對照組比較具有顯著性差異（Ｐ＜００５）；AST高劑量組可上調(diào)胃泌素受體結(jié)合位點(diǎn)數(shù)，與模型組比較具有顯著性差異（Ｐ＜００５）?！窘Y(jié)論】黃芪總苷可增加脾虛模型大鼠因脾虛而降低的胃壁細(xì)胞胃泌素受體結(jié)合位點(diǎn)數(shù)，可能是黃芪發(fā)揮益氣健脾作用的主要有效成分(部位)。關(guān)鍵詞：黃芪總苷／藥理學(xué)；受體，胃腸激素；脾虛；疾病模型，動物；大鼠黃芪是補(bǔ)中益氣湯中的君藥。既往研究顯示補(bǔ)中益氣湯對大黃所致“脾虛”大鼠低下的泌酸功能有一定的提升作用［１］；采用黃芪注射液腹腔注射對大黃、利血平所致的“脾虛”大鼠降低的胃壁細(xì)

3、胞胃泌素受體結(jié)合位點(diǎn)數(shù)有提升作用［2-3］。作為黃芪主要有效部位的黃芪總苷(astragalosides,AST).freela);XDS1倒置生物學(xué)顯微鏡(重慶光學(xué)儀器廠)；HYS4型多頭細(xì)胞收集器(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)；2XZ05型旋片真空泵(浙江臨海市精工真空設(shè)備廠)；DP5500型γ計(jì)數(shù)器(Beckman)等。13主要試劑與藥品鏈霉蛋白酶(Pronase,BoehringerMannheim)；牛血清白蛋白(BSA，華美生物工程公司)；乙二胺四乙酸(EDTA，汕頭市化學(xué)試劑廠)；羥乙基哌

4、嗪乙磺酸(HEPES，Pharmacia);二硫蘇糖醇(DTT，華美生物工程公司)；硅化聚乙酰胺吡咯烷酮(Percoll,.freelacia);胃泌素標(biāo)準(zhǔn)品(純度為97%，Sigma)；１２５Ｉ胃泌素(比活度為629×１０８?Bqmol－１L－１，放化純度為963%，批號為200503，中國原子能科學(xué)研究院同位素室提供)；黃芪總苷由上海滬豐生物科技有限公司研究所提供，批號為20041021，含黃芪甲苷1021%；大黃由廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科提供，經(jīng)鑒定為唐古特大黃；其他化學(xué)品均為國產(chǎn)

5、分析純。14動物分組與造模［４］SD大鼠隨機(jī)分成正常對照組、脾虛模型組。模型組以大鼠1?kg/L大黃液灌胃(10?g/kg)，2次／d，連續(xù)14?d；各組動物常規(guī)喂養(yǎng)，自由飲水。第15天上午處死，實(shí)驗(yàn)前不禁食。15大鼠胃壁細(xì)胞的分離與純化［５］采用胃袋法分離大鼠胃壁細(xì)胞，經(jīng)Percoll純化后，臺盼蘭排除試驗(yàn)鑒定，細(xì)胞活率可達(dá)到95%，細(xì)胞涂片蘇木素―伊紅(HE)染色后鑒定細(xì)胞純度可達(dá)70%～75%，調(diào)整細(xì)胞濃度為?２×１０6／Ｌ。16黃芪總苷的體外孵育設(shè)AST高、中、低3個劑量組，用9?g/L

6、生理鹽水配成濃度分別為10、20、30?g/L，在每2?mL脾虛模型大鼠胃壁細(xì)胞懸液中加入AST?２０?μL，正常對照組及模型對照組則加入PBS?20?μL；37℃孵育30?min，并振蕩100?r/min，1?000?r/min離心5?min，棄去上清，用Medium?C(MC)液重新混懸，并保持2?mL的體積，進(jìn)行放射配基結(jié)合實(shí)驗(yàn)。17放射配合結(jié)合實(shí)驗(yàn)［6］根據(jù)既往基礎(chǔ)試驗(yàn)確定１２５Ｉ?胃泌素飽和終濃度為100?pmol/L，并以此為基礎(chǔ)進(jìn)行單點(diǎn)結(jié)合實(shí)驗(yàn)，求出各組大鼠胃壁細(xì)胞特異結(jié)合位點(diǎn)數(shù)。

7、每樣品均做總結(jié)合管(TB)、非特異性結(jié)合管(NSB)兩組復(fù)管，加樣后37℃孵育30?min，加冷MC液720?μL中止反應(yīng)，迅速用多頭細(xì)胞收集器抽濾至玻璃纖維濾膜，并用冷MC液每管2?mL淋洗濾膜3次。烘干濾膜后，用統(tǒng)一打孔器將濾膜打孔，并置于一次性塑料測定管中進(jìn)行γ計(jì)數(shù)。胃泌素受體放射配基結(jié)合實(shí)驗(yàn)中總結(jié)合管(TB)、非特異性結(jié)合管(NSB)的加樣順序見表1。18壁細(xì)胞胃泌素受體結(jié)合位點(diǎn)數(shù)(n)的檢測根據(jù)放射配基結(jié)合實(shí)驗(yàn)所檢測nTB與nNSB之差計(jì)算特異性結(jié)合nSB，再以nSB與儀器計(jì)數(shù)效率(7

8、0%)之比計(jì)算n蛻變，以n蛻變與標(biāo)記物放射性比活度α之比與ncell之積計(jì)算結(jié)合容量，然后根據(jù)結(jié)合容量進(jìn)一步計(jì)算得出壁細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)數(shù)，計(jì)算公式如下：nSB＝nTB-nNSB，n蛻變＝nSB／07，結(jié)合容量＝（n蛻變／α）×２２２×１０６×ncell，壁細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)數(shù)n＝結(jié)合容量×６02×10１４。19統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS?110統(tǒng)計(jì)軟件，以pareMeans：one］．北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，1995：183．［2］聶克，王汝俊，王建華，等．脾虛大鼠胃壁細(xì)胞胃泌素受體結(jié)合容量及黃芪對其調(diào)控作用