petrifilm測(cè)試片法檢測(cè)環(huán)節(jié)表面菌落總數(shù)效果評(píng)價(jià)

《petrifilm測(cè)試片法檢測(cè)環(huán)節(jié)表面菌落總數(shù)效果評(píng)價(jià)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、Petrifilm測(cè)試片法檢測(cè)環(huán)節(jié)表面菌落總數(shù)效果評(píng)價(jià)傳統(tǒng)的菌落總數(shù)國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法已經(jīng)使用多年，且廣為大家接受，其準(zhǔn)確性毋庸置疑。其主要缺點(diǎn)為：需要專門的實(shí)驗(yàn)室和專業(yè)檢驗(yàn)人員，配制專門的培養(yǎng)基，消毒、清洗工作量大，出具檢驗(yàn)結(jié)果的時(shí)間較長(zhǎng)，很難適應(yīng)現(xiàn)代食品行業(yè)的自檢自控和和食品衛(wèi)生的現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)管，世界各先進(jìn)國(guó)家無不致力于發(fā)展微生物便捷檢測(cè)技術(shù)。本研究是對(duì)美國(guó)3M公司生產(chǎn)用于檢測(cè)環(huán)節(jié)標(biāo)明菌落總數(shù)的測(cè)試片進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室效果驗(yàn)證。1材料和方法1．1材料1.1．1測(cè)試片測(cè)試片是美國(guó)3M公司發(fā)明的一種用于細(xì)菌計(jì)數(shù)的可再生水合物的干膜，它由上下兩層薄膜組成，下層的聚乙烯薄膜上印有網(wǎng)格并且覆蓋有細(xì)菌生長(zhǎng)所需的培養(yǎng)基，上

2、層是聚丙烯薄膜。使用時(shí)只需接種1ml待測(cè)樣品的稀釋液在下層的培養(yǎng)基上，蓋上上層的聚丙烯薄膜，此時(shí)聚乙烯層上的培養(yǎng)基由于水的作用生成水合物，適合普通細(xì)菌生長(zhǎng)。測(cè)試片中含有的紅色指示染色劑可以使菌落著色而便于判讀。1．2標(biāo)準(zhǔn)菌株6金黃色葡萄球菌(標(biāo)準(zhǔn)菌株號(hào)：ATCCl2600)和大腸桿菌(標(biāo)準(zhǔn)菌株號(hào)：ATCC8095)，由復(fù)旦大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院微生物教研室提供。1．3人工污染標(biāo)準(zhǔn)菌株的不銹鋼平板實(shí)驗(yàn)室人工配置含有上述標(biāo)準(zhǔn)菌株菌壤液，按一定比例混合培養(yǎng)后，得到2種高低濃度不同的混合菌壤液，其菌落總數(shù)的準(zhǔn)確濃度用GB4789．2―2003營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板澆注法得出，分別為2680efu／ml和740cfu／

3、ral，每種濃度菌壤液每隔5min吸取2份0．3ml菌壤液，依次平行涂布到2塊(1對(duì))8cmx10cm無菌不銹鋼平板上，共涂抹24對(duì)(高低濃度組分別相當(dāng)于1005cfu／100cm2和278cfu／100em2)，用L型玻璃棒在其表面涂沫均勻，然后將不銹鋼平板放至層流通風(fēng)櫥干燥10mia作為采樣對(duì)象，依干燥時(shí)間順序隨機(jī)化配對(duì)編號(hào)后立即由2名實(shí)驗(yàn)員分別用3M測(cè)試片和國(guó)標(biāo)法對(duì)同組不銹鋼表面進(jìn)行菌落總數(shù)檢測(cè)。營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和相關(guān)材料參照GIM789．2―2003執(zhí)行。1．2方法1．2．1國(guó)際法用無菌鑷將不銹鋼平板放平，用經(jīng)滅菌生理鹽水濕潤(rùn)的4根滅菌棉簽，按照自上而下、從左到右的順序，與不銹鋼平板呈3

4、0°角度嚴(yán)格采樣，每根均勻充分涂抹20cm2采樣對(duì)象表面，每塊不銹鋼平板共涂抹806cm2，剪去與手接觸的棉棒部分，將棉簽頭置于40ml滅菌鹽水試管中，充分振搖后制成原液，然后按GB4789．2―2003進(jìn)行檢驗(yàn)。1．2．2測(cè)片方法用lmL無菌稀釋液水化3M測(cè)試片，在使用前將紙片放置至少1h，使之膠固化。提起上層膜，使膠體部分置于目的表面5s，用手指摩擦上層膜外側(cè)，保證膜與表面充分接觸，使上層膜與目的表面分離，然后將其與培養(yǎng)基合上，將紙片置于(36±1)℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h。1．2．3質(zhì)量控制由工作經(jīng)驗(yàn)豐富的檢驗(yàn)技師嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程配置標(biāo)準(zhǔn)菌壤液以及人工污染不銹鋼平板，測(cè)試片的采樣、培養(yǎng)

5、及結(jié)果判讀由1名3M公司專業(yè)技術(shù)人員獨(dú)立完成；國(guó)標(biāo)法的采樣、培養(yǎng)及結(jié)果判讀由1名檢驗(yàn)技師獨(dú)立完成。所有試驗(yàn)檢測(cè)均在上海市副食品質(zhì)量檢測(cè)站無菌室完成。每個(gè)濃度組不銹鋼平板樣品試驗(yàn)前和試驗(yàn)后各檢測(cè)1次空氣中菌落總數(shù)，以確保實(shí)驗(yàn)室空氣環(huán)境的潔凈度達(dá)到菌落計(jì)數(shù)的要求。1．3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析將菌落總數(shù)計(jì)數(shù)統(tǒng)一轉(zhuǎn)換成100cm2不銹鋼平板采樣面積上的結(jié)果。細(xì)菌在適合生長(zhǎng)的培養(yǎng)基上一般以指數(shù)形式繁殖，為了真實(shí)反應(yīng)菌落總數(shù)不同檢測(cè)方法之間的差異，同時(shí)也是為了滿足菌落總數(shù)檢測(cè)結(jié)果符合配對(duì)t檢6驗(yàn)所需要的正態(tài)分布，一般將菌落總數(shù)結(jié)果取常用對(duì)數(shù)，并使用SPSS．11軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)＝標(biāo)準(zhǔn)誤

6、(Sx)／均數(shù)(Sx)；采樣率：均數(shù)(Sx)／人工配置不銹鋼平板菌落總數(shù)濃度(C)2結(jié)果2．1兩種檢測(cè)方法精密度比較結(jié)果表明，不同濃度菌落總數(shù)污染的不銹鋼表面，3M測(cè)試片法檢測(cè)結(jié)果的RSD均明顯低于國(guó)標(biāo)法，但兩種方法的采樣率基本一致，見表1)。2．2兩種方法檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性結(jié)果表明，兩種檢測(cè)菌落總數(shù)的方法在高濃度和低濃度時(shí)的相關(guān)性不高，差異無顯著性，見表2。2．3兩種方法檢測(cè)結(jié)果一致性比較結(jié)果表明，3M測(cè)片方法和國(guó)標(biāo)法檢測(cè)菌落總數(shù)結(jié)果基本一致，在高低2種菌落總數(shù)濃度時(shí)均無顯著性差異(P>0．05)，見表3。3討論6菌落總數(shù)常用來反映細(xì)菌污染程度，已成為食品加工環(huán)節(jié)表面衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)，也是衛(wèi)

7、生監(jiān)督部門的常規(guī)監(jiān)測(cè)指標(biāo)。國(guó)標(biāo)法作為菌落總數(shù)的常規(guī)檢測(cè)方法，需要配置實(shí)驗(yàn)室和專業(yè)人員，操作較復(fù)雜，所需時(shí)間較長(zhǎng)，不利于食品監(jiān)管部門的日?，F(xiàn)場(chǎng)檢查和食品生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)單位的自身管理，雖然用測(cè)試片法進(jìn)行菌落總數(shù)計(jì)數(shù)的方法已經(jīng)得到了AOAC、AFNOR等國(guó)際組織的認(rèn)可，但是此方法大都用于食品方面的檢測(cè)，對(duì)于檢測(cè)環(huán)節(jié)表面，國(guó)內(nèi)還沒有得到廣泛的應(yīng)用和驗(yàn)證。本實(shí)驗(yàn)對(duì)測(cè)試片法與國(guó)標(biāo)法對(duì)菌落總數(shù)檢測(cè)結(jié)果的比較，發(fā)現(xiàn)測(cè)試