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1、光動(dòng)力療法對(duì)人卵巢癌細(xì)胞系Skov3凋亡的影響論文【摘要】目的通過(guò)對(duì)經(jīng)光動(dòng)力療法(PDT)處理后卵巢癌細(xì)胞系Skov3發(fā)生凋亡情況的研究，探討光動(dòng)力學(xué)療法對(duì)體外培養(yǎng)的人卵巢癌細(xì)胞的影響。方法采用不同能量激光對(duì)不同濃度光敏劑(5-ALA)處理過(guò)的卵巢癌細(xì)胞系(Skov3)進(jìn)行照射,48h后應(yīng)用光鏡、電鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,同時(shí)利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果倒置顯微鏡下經(jīng)光動(dòng)力學(xué)處理后Skov3細(xì)胞體積縮小，細(xì)胞變形、皺縮，細(xì)胞核濃縮、深染，染色質(zhì)密集成斑塊狀，細(xì)胞間失去彼此連接，透射電鏡下可見(jiàn)致密的染色質(zhì)沿核膜下聚集，有凋亡小體形成。流式細(xì)胞儀定量分析最大細(xì)胞凋亡率為60.5%
2、。結(jié)論P(yáng)DT通過(guò)誘導(dǎo)凋亡對(duì)體外培養(yǎng)的Skov3細(xì)胞產(chǎn)生殺傷作用?！娟P(guān)鍵詞】光動(dòng)力學(xué);細(xì)胞凋亡;卵巢癌【Abstract】ObjectiveTheapoptosisofovariancancercelllineSkov3underthephotodynamictherapyictherapyingynecologicalcancer.MethodsOvariancancercelllineSkov3treatedorphologicalcharacteristicsicroscopyandelectronicmicroscopy,andcellapoptosisetry(FCM)
3、.ResultsThecytomorphosisandshrinkage,nucleuscondensationandanachromasia,anddensechromatinliningalongthecellmembraneicroscopeincelllinereceivedphotodynamictherapy.Throughtransmissionelectronmicroseope(TEM),atingatheringalongmembraneofcellnuclearandapoptoticbodyformed.Themaximuminhibitionratei
4、nedbyFCM.ConclusionPhotodynamictherapyinhibitsthegroictherapy;Apoptosis;Ovariancancer光動(dòng)力學(xué)療法(photodynamictherapy,PDT)是除手術(shù)、化療和放療等傳統(tǒng)腫瘤治療手段外的一種新的腫瘤治療方法。它是利用光敏劑在人體內(nèi)選擇性聚集的特性.freelsa′s)染料購(gòu)自北京賽百勝生物公司。3.主要儀器:LH-多功能激光治療儀(天津市雷意光電技術(shù)公司生產(chǎn))由北京協(xié)和醫(yī)院激光室提供;倒置顯微鏡(日本Olympus公司)由北京協(xié)和醫(yī)院婦科腫瘤實(shí)驗(yàn)室提供;JEOL1010型透射電鏡(日本電子公
5、司)由北京協(xié)和醫(yī)院電鏡中心提供;EPICS-profileⅡ流式細(xì)胞儀(美國(guó)coulter公司)由北京協(xié)和醫(yī)院流氏細(xì)胞儀室提供。二、方法1.細(xì)胞培養(yǎng)：取卵巢癌細(xì)胞系Skov3，貼壁生長(zhǎng)在含有10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。將細(xì)胞按1×105/孔接種于96孔板中，細(xì)胞培養(yǎng)在5%CO2濃度、飽和濕度及37℃條件下進(jìn)行，細(xì)胞融合80%時(shí)以0.25%胰酶消化傳代。含10%熱滅活小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液。2.光動(dòng)力學(xué)療法。光敏劑5-ALA分別按0.1、0.5、1.0、2.5mmol/L的濃度配制，按每孔100μl加入已培養(yǎng)24h的細(xì)胞中，每一種光敏劑濃度與光照強(qiáng)度
6、設(shè)3個(gè)復(fù)孔，對(duì)照組分別為僅照光而不加光敏劑組和既不加光敏劑也不照光組。細(xì)胞加入光敏劑后避光培養(yǎng)4h。棄去含光敏劑的培養(yǎng)液，每孔加入1640培養(yǎng)液200μl后在避光條件下以波長(zhǎng)630nm的氦-氖激光照射各孔細(xì)胞，照射光能量密度分別設(shè)定為0.1、0.5、2.5、12.5J/cm2，功率為53mTT比色法分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定光敏劑濃度及光照強(qiáng)度。按上述濃度和強(qiáng)度處理細(xì)胞后，胰酶充分消化并收集細(xì)胞，以4℃，1000r/min離心10min，棄上清液，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌細(xì)胞2次，重新懸浮細(xì)胞于200μl結(jié)合緩沖液(bindingbuffer)中。加入10μlAnnexinⅤ-FIT
7、C及5μlPI(碘化丙啶)染液，混勻后避光室溫反應(yīng)15min后加入300μl結(jié)合緩沖液(bindingbuffer)，1h內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果判斷,AnnexinⅤ+/PI-為凋亡細(xì)胞;AnnexinⅤ+/PI+為壞死細(xì)胞;AnnexinⅤ-/PI-為存活細(xì)胞。結(jié)果一、細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化貼壁生長(zhǎng)的Skov3細(xì)胞經(jīng)光動(dòng)力治療后，相鄰細(xì)胞間失去彼此連接，輪廓更加清晰可見(jiàn)，細(xì)胞收縮變圓，附壁能力減弱，容易從培養(yǎng)板上脫落下來(lái)。凋亡后期細(xì)胞體積縮小、變形、皺縮，染色質(zhì)濃縮邊集，形成由膜狀
