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1、HBsAg與GM-CSF基因雙表達載體的構(gòu)建及其免疫效果中國生物制品學雜志2OO8年5月第2l卷第5期ChinJBiologicalsMay2O08,Vo1.21No.5?401?中國圖書分類號c8R373.2+1文獻標識碼A文章編號l帥4.5503(20憾)05.o40l—o4【預(yù)防制品】HBsAg與GM-CSF基因雙表達載體的構(gòu)建及其免疫效果冷梅閆剛遲春萍韓順子吳曉娟趙大鵬汪春義鄭全莉李鑫李雨桐張秀霞姜崴【摘要】目的構(gòu)建乙型肝炎表面抗原基因(HBsAg)與GM—CSF基因的雙表達載體,提高乙肝病毒DNA疫苗的免疫效
2、果.方法將微小病毒內(nèi)部核糖體進入位點(mES)基因克隆到質(zhì)粒pVAXI多克隆位點,再將HBsAg基因和GM—CSF基因依次克隆到ruES的上,下游多克隆位點處,構(gòu)建雙表達載體pHIG.將pHIG轉(zhuǎn)染到COS-7細胞中,檢測瞬時表達情況,并用雙表達質(zhì)粒pHIG免疫BALB/c小鼠,檢測免疫后小鼠血清中抗一HBs及其脾臟T細胞表面CD4,CD8分子的數(shù)量.結(jié)果在轉(zhuǎn)染pHIG質(zhì)粒的COS-7細胞上清液中有HBsAg的表達,pHIG雙表達質(zhì)粒組比pVAX/FIBs組抗體產(chǎn)生時間提前2周,抗體陽轉(zhuǎn)率提高2倍,小鼠脾臟T細胞表面C
3、IM分子數(shù)量及CIM/CD8值均高于pVAX/HBs組.結(jié)論HB&Ag與GM.CSF基因雙表達質(zhì)粒能引起小鼠特異性免疫應(yīng)答,并可提高免疫效果.【關(guān)鍵詞】乙型肝炎表面抗原;DNA疫苗;粒細胞一巨噬細胞集落刺激因子;內(nèi)部核糖體進入位點ConstructionandllnmuneEffectofRecombinantPlasmidforCo..expressionoflib..sAgandGM.CSFGenesLENGMei,YANGang,CHIChun—ping,etal(伽g胍InstituteofBiolog
4、icalProducts,Changchun130062,China)【Abstract】ObjectiveToconstructarecombinantplasmidforco-expressionofFIBsAgandGM-CSFgenesandenhancethein~nuneeffectofhepatitisBvirusDNAvaccine.MethodsCloneparvovhusinternalribosomalentrysite(IRKS)geneintoplasmidpVAXI,thencloneHB&
5、amp;AgandGM-CSFgenesupstreamanddownstreamtoIRKS.Transfecttheconstructedco-expressionvectorpHIGtoCOS-7cellsanddetenninethetransientexpressionofHBsAg.ImmunizeBALB/cmicewithpHIGanddetenninetheanti-HBsinseraas,wellas,CD4andCD8moleculesonthesurfaceofTcellsinspleensof
6、mice.ResultsHBsAgwasexpressedintheculturesupematantofCOS-7cellstrarL~一fectedwithpHIG.Theanti-HBsin8~l-aofmiceimmunizedwithpHIGWasproduced2weeksearlierthanthatwithpVAX/HBs,andtheanti-HBspositiveconversionrateoftheformerWas2tilneshigherthanthatofthelatter.BothCIMm
7、oleculecountandtheratioofCIMtoCD8onsurfaceofTcellsinspleensofmiceimmunizedwithpHIGweresignificantlyhigherthanthosewithpVAX/HBs.ConduslonTheco-ex-pressionvectorforHB&AgandGM-CSFinducedspecificinlinuneresponseinmiceandenhancediminuneeffect.【Keywords】HBsAg;DNAv
8、accine;GM—CSF;Internalribosomalentrysite核酸免疫是近年來發(fā)展起來的一種新型免疫方法.通過對乙型肝炎DNA疫苗的研究發(fā)現(xiàn),其不僅可以誘導(dǎo)體液免疫,還可誘導(dǎo)較強的CTL反應(yīng)…1,因此對乙肝可起到治療作用,但其免疫效果尚需進一步提高.粒細胞.巨噬細胞集落刺激因子(Granulocyte.macro
