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1、不同精液稀釋粉與保存溫度對(duì)豬精液的保存效果俞湘麟?yún)顷魂滩芙▏鴮O東東(1上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心201103韓盛利張佩華吳金林朱永軍2上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所201106)稀釋精液的保存時(shí)間依稀釋液及保存環(huán)境的不同而有很大差別，能夠保證其活率在0．7的時(shí)限一般為5d【1。精子活力在0．5級(jí)以上才可用于人工授精【2-47，也有認(rèn)為需達(dá)到0．6級(jí)以上】。目前規(guī)?；i場(chǎng)在實(shí)施人工授精技術(shù)時(shí)大多采用商品化的營養(yǎng)稀釋粉，但由于供應(yīng)渠道眾多，采購時(shí)往往忽視商品的技術(shù)參數(shù)，把短效當(dāng)成長效使用，或配制不精確、放置時(shí)間過長，這樣就得不到應(yīng)有的效果。本試驗(yàn)探討不
2、同的精液營養(yǎng)稀釋粉在不同的保存溫度下對(duì)豬精液保存效果的觀察。1材料與方法1．1精液采集與測(cè)試時(shí)間6頭種公豬精液取自上海市3個(gè)種豬場(chǎng)，公豬耳號(hào)分別是：長白豬4009，杜洛克豬ll7—2、130—1、391、700、1406。檢測(cè)由專職人員負(fù)責(zé)。測(cè)試時(shí)間自2006年11月13日至12月813止。1．2精液營養(yǎng)稀釋粉1．2．1精液稀釋粉：采用不同時(shí)效的4種精液稀釋粉，市售的長效、中效、短效和自配稀釋粉。自配稀釋粉為：葡萄糖27．5檸檬酸三鈉6．9g、碳酸氫鈉1．0g、乙二胺四乙酸二鈉2．35g、檸檬酸2．9g、三羥基氨基甲烷5．65g。1．2．2稀釋液配
3、制：市售稀釋液配制按照產(chǎn)品使用進(jìn)行。自配稀釋粉溶于1000ml蒸餾水中，自配好的稀釋液使用前加入慶大霉素注射液tOml／2支。51．3主要儀器顯微恒溫板、恒溫冰箱、意大利產(chǎn)MediChimica精液密度測(cè)定儀、精密分析天平及其它試驗(yàn)常規(guī)儀器。1．4試驗(yàn)設(shè)計(jì)按常規(guī)采精法采集6頭公豬的合格精液，用MediChimi—ca精液密度測(cè)定儀檢測(cè)原精精子數(shù)，分別按每1O0ml含40億有效精子數(shù)進(jìn)行稀釋，每頭公豬精液取4份，計(jì)24份。稀釋時(shí)嚴(yán)格控制稀釋液溫度和原精溫度相一致，緩慢加入，稀釋過程在15rain內(nèi)完成。精液稀釋完成后，標(biāo)記、密封并用毛巾裹上一同置于1
4、7℃恒溫冰箱內(nèi)帶回實(shí)驗(yàn)室。4份稀釋精液分別保存于12、17、20、25℃恒溫冰箱內(nèi)，觀察0～7d的精子活力和精子學(xué)形態(tài)的保存效果，每天上、下午觀察2次，每種營養(yǎng)稀釋液重復(fù)6次。1．5精液品質(zhì)檢查1．5．1精子活力：檢查時(shí)將稀釋精液預(yù)熱至37℃，取10～100HI置干凈的載玻片上，用22mrfl蓋玻片蓋上，在400倍顯微鏡下觀察10個(gè)不同視野，分別記錄精子活動(dòng)狀況。采用1O級(jí)制評(píng)力法估測(cè)視野中直線運(yùn)動(dòng)的精子占總精子的百分率，例有70％的精子呈前進(jìn)運(yùn)動(dòng)，則活力為0．7，以此類推。1．5．2精子活率：用10mI試管取伊紅染液(1％濃度)lmI，加入精液0
5、．2ml，置37℃水浴鍋中恒溫浸染20min，取1滴伊紅染后的精液，再滴加1滴5％苯胺黑或苯胺藍(lán)混勻染色后抹片。用顯微鏡在400倍下觀察，死精子染為紅色，活精子不著色。每個(gè)抹片觀察200個(gè)以上精子，得到活率，以“％”表示。52結(jié)果利用Micr0S。ftexcel2000軟件對(duì)不同稀釋液處理的精液在不同保存溫度下的保存時(shí)間、保存時(shí)間I}缶界點(diǎn)精子活力和存活率進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。__2．1精子活力4種不同營養(yǎng)稀釋液稀釋的精液，分別保存于12、17、20、25℃恒溫冰箱內(nèi)，觀察0～7d的精子活力，其結(jié)果如表1。表1不同稀釋精液在不同保存溫度下的精子活力比較(單
6、位：℃、級(jí))2．2精子活率4種不同營養(yǎng)稀釋液稀釋的精液，保存予l7℃恒溫冰箱內(nèi)．染色鏡檢0～7d的精子形態(tài)，其結(jié)果如表2。表2不同稀釋液對(duì)稀釋精液保存的精子活率比較3小結(jié)與討論3．1適宜的保存溫度豬精液對(duì)溫度較為敏感，溫度較高時(shí)(25℃)，可能增強(qiáng)了精子的運(yùn)動(dòng)量，消耗能量大，加劇精子衰老過程，存活時(shí)間相對(duì)短些；溫度較低時(shí)(12℃)保存效果也很差，據(jù)報(bào)道豬精子對(duì)低溫很敏感，只能耐受15℃以上的溫度，這涉及膜對(duì)溫度的敏感性。本次測(cè)試結(jié)果表明以l7℃恒溫保存為最適宜，與報(bào)道相符。但短效稀釋粉和白配的稀釋粉稀釋的精液也可適當(dāng)降低保存溫度，有待進(jìn)一步研討。3
7、．2適宜的保存時(shí)間目前普遍認(rèn)為精子活力在O．5級(jí)以上，也有認(rèn)為需達(dá)到0．6級(jí)，精子活率0．7以上才能保證輸精質(zhì)量，所以在此以活力0．5級(jí)、活率0．75時(shí)的保存時(shí)間為參照，比較不同稀釋粉對(duì)精液的保存效果。測(cè)試表明精液保存時(shí)間與產(chǎn)品特性相吻合，精子活力0．5級(jí)時(shí)，長效稀釋粉稀釋的精液在17～2O℃時(shí)可保存5．09～5．36d，中效稀釋粉稀釋的精液在l2～l7℃時(shí)可保存3．O8～4．12d，短效稀釋粉稀釋的精液在12～l7℃時(shí)可保存3．11～3．12d，自配稀釋粉稀釋的精液在12～17'C時(shí)同樣可保存3．10～3．18d(表3)。表3保持精子活力0．5級(jí)
8、時(shí)的保存天數(shù)但稀釋后的精液，精子活率衰弱很快。在17℃保存條件下精子活率0．7時(shí)，長效稀釋粉稀釋的精液可保存3．07d，中
