北柴胡總皂苷提取工藝探究

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1、北柴胡總皂苷提取工藝探究【摘要】:目的:優(yōu)選從北柴胡中提取總皂苷的最佳工藝。方法:以總皂苷含量為指標(biāo),采用正交試驗(yàn),考察了乙醇濃度、乙醇用量、提取次數(shù)和回流時(shí)間對(duì)總皂苷得率的影響。結(jié)果:總皂苷最佳工藝為:70%乙醇濃度,溶劑用量為藥材的12倍,回流提取90min,提取3次。結(jié)論:該工藝簡單可行,是提取北柴胡總皂苷的有效途徑?！娟P(guān)鍵詞】:北柴胡;總皂苷;提取工藝【中圖分類號(hào)】R283.3【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1007-8517(2010)06-041-2北柴胡(BupleurumchinenseDC.)為傘形科柴胡屬植物

2、,收載于中國藥典,為藥用柴胡的主要種源。柴胡具有驅(qū)散退熱、舒肝生陽之功效,主治感冒發(fā)熱、寒熱往來、瘧疾、胸肋脹痛、月經(jīng)不調(diào)及子宮脫垂等癥?，F(xiàn)代藥理研究證明柴胡具有解熱、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗炎、免疫增強(qiáng)、保肝利膽、抗菌、抗病毒及抗腫瘤等作用[1-2],具有極高的藥用研究價(jià)值。柴胡主要的有效成分是揮發(fā)油和皂苷,皂苷為五環(huán)三萜類齊墩果烷型衍生物,是最主要的活性成分之一[3]。本文利用不同濃度乙醇提取,通過正交試驗(yàn)確定北柴胡中總皂苷的最佳提取工藝條件,為更有效的開發(fā)和利用柴胡資源提供理論參考和實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)。81儀器與材料1.1儀器721分光光

3、度計(jì)(上海分析儀器廠);RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生物儀器廠);JJ200精密電子天平(常熟雙杰測(cè)試儀器廠);MettlerToledo精密電子天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司);DFT-100手提式高速中藥粉碎機(jī)(溫嶺大德中藥機(jī)械有限公司)。1.2材料柴胡2008年8月采自山西省平定縣,經(jīng)鑒定為兩年生北柴胡。陰干粉碎,在真空干燥器中以60℃干燥至恒重,備用。柴胡皂苷(中國藥品生物制品檢定所);其余試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1總皂苷的測(cè)定2.1.1對(duì)照品溶液的制備:精密稱取柴胡皂苷標(biāo)準(zhǔn)品5mg,用乙醇溶解

4、置20mL容量瓶中,精密吸取5ml,用乙醇定容到50ml,作為對(duì)照品溶液。2.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:精密量取照品溶液各0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL置于具塞試管中,加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml,高氯酸0.8ml,60℃水浴158min取出,冰水冷卻數(shù)分鐘,搖勻,以空白作對(duì)照,在400-800nm進(jìn)行紫外掃描。對(duì)照品溶液和供試品溶液的最大吸收都在603nm[4]。以吸光度值為y軸,柴胡皂苷a濃度(mg/ml)為x軸,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到回歸方程Y=1.5468+5.7295X,R2=0.999

5、2。2.1.3供試品溶液的制備和皂苷含量的測(cè)定:準(zhǔn)確稱取陰干粉碎的北柴胡根5g,按單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)中不同的提取條件利用索氏提取器回流提取,提取液減壓濃縮成膏狀。取乙醇浸膏,用水飽和的正丁醇萃取3次,合并萃取液,減壓濃縮至干,用乙醇溶解并定容到一定體積,作為供試品溶液。依照2.1.2項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度,代入回歸方程中計(jì)算總皂苷的含量,并計(jì)算總皂苷的得率:總皂苷的得率(%)=(提取液中總皂苷濃度×提取液體積)/對(duì)應(yīng)的原料重量×100%。在此過程中分別考察不同乙醇濃度、不同乙醇用量、不同提取次數(shù)和回流時(shí)間對(duì)總皂苷提取的影響。然

6、后結(jié)合正交試驗(yàn)確定最佳提取工藝。2.2單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析2.2.1乙醇濃度對(duì)總皂苷得率的影響:表1乙醇濃度對(duì)總皂苷得率的影響乙醇濃度50%60%70%80%90%總皂苷得率3.56%4.17%4.82%4.32%3.35%8如表1所示。結(jié)果表明隨著乙醇濃度的增加總皂苷得率呈上升趨勢(shì)。用60%-80%乙醇提取得率較高,70%的得率最高。當(dāng)乙醇濃度高于80%時(shí),提取液顏色加深并且總皂苷得率明顯下降。這可能是由于提取溶劑極性減少使提取液中脂溶性物質(zhì)增加,同時(shí)較小的乙醇濃度不利于苷的析出,使總皂苷含量明顯下降。2.2.2乙醇用量對(duì)

7、總皂苷得率的影響:表2乙醇用量對(duì)總皂苷得率的影響乙醇用量(倍)68101214總皂苷得率4.06%4.51%4.61%4.63%4.65%如表2所示。結(jié)果表明隨著乙醇用量的增加,總皂苷收率增加,但當(dāng)乙醇用量大于藥材10倍時(shí)其產(chǎn)率的增加不明顯。從經(jīng)濟(jì)角度考慮,溶劑用量不應(yīng)太大,故本實(shí)驗(yàn)選擇乙醇用量為原藥材的10倍為最佳用量。2.2.3提取次數(shù)對(duì)總皂苷得率的影響:表3提取次數(shù)對(duì)總皂苷得率的影響提取次數(shù)12345總皂苷得率3.26%4.67%4.74%4.80%4.80%如表3所示。結(jié)果表明隨著提取次數(shù)的增加,總皂苷收率增加,但當(dāng)

8、提取次數(shù)大于3次以后其皂苷得率增加不明顯,基本保持不變,故本實(shí)驗(yàn)選擇藥材的提取次數(shù)為3次。2.2.4回流時(shí)間對(duì)總皂苷得率的影響:表4回流時(shí)間對(duì)總皂苷得率的影響回流時(shí)間(min)3060901201508總皂苷得率3.11%4.02%4.68%4.71%4.60%如表4所示。結(jié)果表明隨著回流