biolog接種液配制方法

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1、接種液制備方法一、GN/GP-IF（革蘭氏陰性陽性菌接種液）配方如下：0.40%sodiumchloride(NaCl)氯化鈉(維持滲透壓)0.03%PluronicF-68(e.g.,Sigma#P7061)聚醚F-68(一種非離子表面活性劑，可降低表面張力，使菌體易于分散在水中)0.02%GellanGum(e.g.,Phytagel?,Sigma#P8169)吉冷膠(一種食用膠，可增大液體粘度，使菌體均勻分散不易沉降)制備過程如下：1.加0.2克GellanGum至1升水中；2.煮沸并持續(xù)攪拌，直至GellanGum完全溶解；3.停止加熱，繼續(xù)攪拌；4.加4克NaCl，攪拌至完全溶解

2、；5.加0.3克聚醚F-68，攪拌至完全溶解；6.分裝到20×150mm的試管中，每管裝19mL左右；7.在121℃下滅菌30分鐘，備用。二、AN-IF（厭氧菌接種液配置方法）1．在1升的耐熱玻璃容器中加入750ml純凈水，然后加入下列試劑：3.0gNaCl0.63gNaHCO30.225gPluronicF-68聚醚F-68(一種非離子表面活性劑，可降低表面張力，使菌體易于分散在水中)0.15gPhytagel1.將玻璃容器放在加熱板上，蓋子稍微旋松并開始低速磁力攪拌。開啟加熱開關，加熱使溶液沸騰，溶液會變得澄清。再加熱至完全沸騰，直到泡沫上升到瓶頸。2.旋緊蓋子，將容器從加熱板上移走，

3、立即放到高壓滅菌器中滅菌30分鐘。3.當高壓滅菌器冷卻到80-90℃時，打開高壓滅菌器再次旋緊蓋子。然后馬上將玻璃容器放入?yún)捬跖囵B(yǎng)箱。4.在厭氧培養(yǎng)箱中，旋開蓋子。用和泵相連的移液管將培養(yǎng)箱中的氣體泵入溶液中吹洗溶液，直到形成的泡沫到達玻璃容器的頸部（或約20分鐘）。5.向容器中加入1.125ml1%的巰基乙酸鈉（Na-thioglycolate）溶液，混合均勻。蓋上蓋子（稍微有點松），過夜冷卻。6.第二天向玻璃容器中加入0.375ml0.15%的亞甲基綠（methylenegreen），加入前溶液必須為常溫，混合均勻，觀察容器，溶液呈藍綠色。在一天內(nèi)，藍綠色會還原成無色，如果48小時后溶

4、液還沒有澄清，向溶液中再加入0.1ml1%的巰基乙酸鈉溶液，如果需要可以重復再加入，但不能超過0.5ml。丟棄不能還原成澄清的溶液。7.所有的試管和蓋子、移液管和移液器在使用之前應提前48小時放入?yún)捬跖囵B(yǎng)箱，以便除去殘留氧氣。8.利用移液器或連續(xù)注射器在每個無菌玻璃試管（20×113mm）中加入14ml接種液，旋緊蓋子。9.把裝有接種液的試管保存在厭氧培養(yǎng)箱或厭氧罐里，不能直接保存在有氧氣的環(huán)境中。三、FF-IF：用于鑒定絲狀真菌時配制菌懸液用配方：0.03%Tween40(e.g.,Sigma#P1504)吐溫400.25%GellanGum(e.g.,Phytagel?,Sigma#P

5、8169)吉冷膠制備過程如下：1.將1升水加熱至沸騰；2.加2.5克GellanGum和0.3克吐溫40，攪拌；3.停止加熱，繼續(xù)攪拌至完全溶解，溶解呈透明狀；4.分裝到20×150mm的試管中，每管裝16mL左右。5.在121℃下滅菌30分鐘，備用。