snt 2464-2010 洋蔥條黑粉病菌檢疫鑒定方法

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1、中華人民共和國出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)犛犖／犜２４６４—２０１０洋蔥條黑粉病菌檢疫鑒定方法犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犝狉狅犮狔狊狋犻狊犮犲狆狌犾犪犲犉狉狅狊狋２０１００１１０發(fā)布２０１００７１６實(shí)施中華人民共和國發(fā)布國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局中華人民共和國出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)洋蔥條黑粉病菌檢疫鑒定方法ＳＮ／Ｔ２４６４—２０１０中國標(biāo)準(zhǔn)出版社出版北京復(fù)興門外三里河北街１６號(hào)郵政編碼：１０００４５網(wǎng)址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ電話：６８５２３９４６６８５１７５４８中國標(biāo)準(zhǔn)出版社秦皇島印刷廠印刷開本８８０×１２３０１／１６印張０．５字?jǐn)?shù)８千字２０１０年４

2、月第一版２０１０年４月第一次印刷印數(shù)１—１６００書號(hào)：１５５０６６·２２０７０４定價(jià)１４．００元犛犖／犜２４６４—２０１０前言本標(biāo)準(zhǔn)的附錄Ａ和附錄Ｂ均為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由國家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會(huì)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中華人民共和國天津出入境檢驗(yàn)檢疫局。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：廖芳、羅加鳳、郭京澤、張?jiān)＞④S庭、崔鐵軍、王金成、劉鵬。本標(biāo)準(zhǔn)系首次發(fā)布的出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。Ⅰ犛犖／犜２４６４—２０１０洋蔥條黑粉病菌檢疫鑒定方法１范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了進(jìn)出境植物檢疫中洋蔥條黑粉病菌（Ｕｒｏｃｙｓｔｉｓｃｅｐｕｌａｅ）的檢疫鑒定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于蔥屬寄主上洋蔥條黑粉

3、病菌的檢疫鑒定。２規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。ＧＢ／Ｔ１８０８５植物檢疫小麥矮化腥黑穗病菌檢疫鑒定方法３原理洋蔥條黑粉病菌（ＵｒｏｃｙｓｔｉｓｃｅｐｕｌａｅＦｒｏｓｔ）主要為害蔥屬（Ａｌｌｉｕｍｓｐｐ．）植物，不危害蔥屬以外的植物。洋蔥條黑粉病菌寄主范圍、孢子球形態(tài)特征、寄主植物的癥狀（參見附錄Ａ）、洋蔥瓊脂培養(yǎng)基上孢子球萌發(fā)特性

4、是鑒定該病菌的依據(jù)。４儀器和用具多功能顯微鏡（具測微尺）、體視顯微鏡、手持放大鏡、低速離心機(jī)、往復(fù)式振蕩器、渦旋振蕩器、干熱滅菌器、高壓滅菌器、普通天平（感量１／１００ｇ）、生物安全柜或超凈臺(tái)、生物培養(yǎng)箱（具光照）、可調(diào)微量加樣器（５μＬ～２００μＬ）、三角瓶（２５０ｍＬ）、離心管、載玻片（長×寬為２５．３ｍｍ×７６．２ｍｍ，厚０．８ｍｍ）、蓋玻片（１８ｍｍ×１８ｍｍ）、Ｐａｒａｆｉｌｍ膜或鋁箔紙、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管（１．５ｍＬ）、培養(yǎng)皿、接種針、三角推。５試劑和培養(yǎng)基５．１試劑有效成分為０．２５％的次氯酸鈉溶液、吐溫２０（Ｔｗｅｅｎ２０）、席爾氏浮載劑（見Ｇ

5、Ｂ／Ｔ１８０８５—２０００附錄Ａ中席爾氏浮載劑配制方法）、封片劑、無熒光顯微鏡物鏡鏡頭油（Ｎｄ＝１．５１６）、瓊脂粉、滅菌水。５．２培養(yǎng)基洋蔥瓊脂培養(yǎng)基用于病原菌培養(yǎng)性狀的觀察及病原菌的保存。洋蔥瓊脂培養(yǎng)基的制備：稱取瓊脂粉１５ｇ～２０ｇ，加入９００ｍＬ水和１００ｍＬ新鮮的健康洋蔥汁液，裝入三角瓶中，１２１℃高壓滅菌３０ｍｉｎ，待冷卻至４０℃左右，倒入培養(yǎng)皿，凝固后，用三角推蘸取懸浮液均勻涂布在培養(yǎng)基表面。６實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)６．１種子的洗滌檢驗(yàn)６．１．１樣品制備及離心與定容按ＧＢ／Ｔ１８０８５執(zhí)行。６．１．２鏡檢按ＧＢ／Ｔ１８０８５檢查洋蔥條黑粉病菌孢子球的有無及其形態(tài)大

6、小，經(jīng)檢查含有可疑孢子球的進(jìn)一步作萌發(fā)實(shí)驗(yàn)。１犛犖／犜２４６４—２０１０６．２鱗莖與寄主殘?bào)w的檢驗(yàn)用放大鏡或肉眼仔細(xì)檢查鱗莖或寄主殘?bào)w表面是否存在銀灰色泡狀囊腫，用針刺破銀灰色泡狀囊腫，用席爾氏浮載劑制成玻片，在顯微鏡下觀察孢子球的形態(tài)大小，并將可疑孢子球進(jìn)一步作萌發(fā)實(shí)驗(yàn)。６．３孢子球的萌發(fā)試驗(yàn)在Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ離心管中加入適量次氯酸鈉溶液，挑取一定數(shù)量的孢子球放入，密度以顯微鏡低倍視野下４０個(gè)～６０個(gè)孢子球?yàn)橐耍脺u旋振蕩器混合，消毒５ｍｉｎ后，以３０００ｒ／ｍｉｎ離心１ｍｉｎ，立即用微量加樣器吸去上清液，加無菌水離心清洗２次，將孢子球沉淀物轉(zhuǎn)至洋蔥瓊脂培養(yǎng)基上

7、培養(yǎng)，在２０℃、１２ｈ光照、７５％的相對濕度條件下生物培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，重復(fù)３個(gè)培養(yǎng)皿。７鑒定特征７．１鱗莖與寄主殘?bào)w的癥狀種子發(fā)芽后２周內(nèi)，病菌從子葉基部等處侵入，病苗葉色微黃，局部膨腫扭曲，銀灰色縱向排列的不透明的泡狀瘤腫出現(xiàn)在子葉和葉片上，隨后破裂露出黑褐色的孢子團(tuán)，成株期的葉、葉鞘和鱗片出現(xiàn)銀灰色瘤腫條斑，病部充滿黑粉，重病株矮化或死亡。７．２孢子球形態(tài)特征洋蔥條黑粉病菌的孢子球由許多細(xì)胞組成，孢子球直徑１５μｍ～２０μｍ，多為８個(gè)孢子球聚在一起。孢子球中央有暗色，大小在１１μｍ～１５μｍ的冬孢子常為１個(gè)，甚少２個(gè)，成熟孢子球的冬孢子外形為不規(guī)則的多面體，壁