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1、免疫組化是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)。免疫組化實驗所用的抗體有哪些？免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體，應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后，從動物血中所獲得的免疫血清，是多個B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。免疫組化實驗所用的組織和細(xì)胞標(biāo)本有哪些？實驗所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類，前者包括石蠟切片（病理
2、大片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本最常用、最基本的方法，對于組織形態(tài)保存好，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對照觀察；還能長期存檔，供回顧性研究；石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響，但可進(jìn)行抗原修復(fù)，是免疫組化中首選的組織標(biāo)本制作方法。石蠟切片為什么要做抗原修復(fù)？有哪些方法？石蠟切片標(biāo)本均用甲醛固定，使得細(xì)胞內(nèi)抗原形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇，同時蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽。所以要求在進(jìn)行IHC染色時，需要先進(jìn)行抗原修復(fù)或暴露，即將固定時分子之間所形成的交聯(lián)破壞，而恢復(fù)抗原的
3、原有空間形態(tài)。常用的抗原修復(fù)方法有微波修復(fù)法，高壓加熱法，酶消化法，水煮加熱法等，常用的修復(fù)液是pH6.0的0.01mol/L的檸檬酸鹽緩沖液。免疫組化常用的染色方法有哪些？根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標(biāo)法，親和組織化學(xué)法，后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測方法。這種方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗體）在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位，其中生物素——抗生物素染色法最常用?？贵w交叉反應(yīng)的原因：指抗體除與其相應(yīng)的抗原發(fā)生特異性反應(yīng)外還與其它抗原發(fā)生反應(yīng)。產(chǎn)生的原因有以下幾個方面：1.抗原特異性指用于免疫動物的抗原性物質(zhì)中含有多種抗原分子，
4、它引起動物產(chǎn)生針對多種抗原分子特異性的相應(yīng)抗體。任何其它物質(zhì)只要含有一種或多種與上述物質(zhì)相同的抗原分子，必將與上述多特異性的抗血清發(fā)生交叉反應(yīng)。2.共同決定簇即兩種抗原分子中都含有相同的抗原決定簇。3.決定簇相似，兩種不同的抗原決定簇，如果結(jié)構(gòu)大致相同，由于空間構(gòu)象關(guān)系，某一決定簇的相應(yīng)抗體可以與大致相同的決定簇發(fā)生交叉反應(yīng)。當(dāng)然抗原一抗體之間構(gòu)象相似時的結(jié)合力小于吻合時的結(jié)合力。歡迎常到免疫版討論區(qū)做客我為人人，人人為我免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)一、免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的概述*免疫細(xì)胞化學(xué)（immunocytochemistry,ICC）-是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理
5、，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定細(xì)胞內(nèi)抗原的成分（主要是多肽和蛋白質(zhì)），對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究，稱為～。（一）對抗原和抗體的要求*具有特異性高和親和力強(qiáng)的抗體是實驗成功的首要條件。-對抗體的要求：純度高、比活性強(qiáng)；*高度特異性抗體的獲得，取決于抗原的純度。-對抗原的要求：純度高，免疫原性強(qiáng)，穩(wěn)定無變化。（二）抗原（antigen,Ag）*抗原的概念：凡是在機(jī)體內(nèi)引起體液免疫和（或）細(xì)胞免疫反應(yīng)的物質(zhì)，稱為抗原?？乖哂袃蓚€方面的特性：-免疫原性：引起機(jī)體產(chǎn)生抗體和（或）致敏淋細(xì)胞的特性；-免疫反應(yīng)性：抗原能與相
6、應(yīng)的抗體及致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異的結(jié)合或反應(yīng)的特性。*根據(jù)抗原是否顯示免疫原性分為：-完全抗原：分子量較大，一般在10kDa以上，并具有較復(fù)雜的化學(xué)組成。*免疫原性最強(qiáng)的是蛋白質(zhì)抗原，多糖次之；脂類和核酸必需和蛋白質(zhì)及多糖形成復(fù)合物才具有良好的免疫原性。-半抗原：又稱為不完全抗原，分子量較小。例如：某些短肽、多糖、類脂和藥物等。*半抗原必需與載體結(jié)合，才能獲得免疫原性。載體*通常是具有高度免疫原性的大分子物質(zhì)，具有將免疫原性傳遞給耦聯(lián)的半抗原能力。-常用的載體有鑰孔血藍(lán)蛋白（keyholelimpethemocyanin，KLH）、牛血清白蛋白（bovinese
7、rumalbumin,BSA）、卵白蛋白（Ovalbumin，OVA）等。-用戊二醛或碳化二亞胺作為交聯(lián)劑通過功能基團(tuán)-NH2、-COOH等將半抗原結(jié)合到載體上。結(jié)合比例為5kDa結(jié)合5～25個分子的小肽。（三）抗體（antibody,Ab）1、抗體的概念：*機(jī)體受到抗原刺激后，由漿細(xì)胞合成并分泌出一類具有與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的球蛋白，被稱為抗體。-抗體主要存在于血清內(nèi)；-抗體都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白并不一定都是抗體。-免疫球蛋白根據(jù)重鏈的結(jié)構(gòu)及抗原特異性不同分為五種，既IgG、IgD、IgE、IgA、IgM。2、免疫組化實驗中常用的抗體：單克隆抗體和多克
8、隆抗體。*單克隆抗體：是一個B淋巴細(xì)胞
