載脂蛋白a1(apoa1) 免疫比濁法

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1、項目載脂蛋白A1（APOA1）方法免疫比濁法目錄1.檢測原理2.標本采集與處理2.1受檢者的準備2.2靜脈采血2.3抗凝劑2.4標本處理3.試劑3.1試劑3.2校準血清3.3試劑與校準血清的穩(wěn)定性4.儀器5.操作6.計算7.操作性能7.1精密度7.2準確度7.3靈敏度7.4可報告范圍7.5特異性7.6干擾8.參考值9.臨床意義附錄A:參數(shù)1.檢測原理APOA-1與特異的抗血清反應(yīng)形成不溶性的復(fù)合物，可在340nm測定該不溶性復(fù)合物的濁度。通過測定標準品，建立一個吸光度對APOA-1濃度的標準曲線就可以測定出樣品

2、中的APOA-1濃度。2．標本采集與處理2.1受檢者的準備：病人空腹12h，不飲酒24h后采集血樣。體檢對象抽血前應(yīng)有兩周的的正常狀況記錄。妊娠后期各項血脂都會增高，應(yīng)在產(chǎn)后或中哺乳后3個月檢驗才能反應(yīng)其基本血脂水平。注意有無應(yīng)用影響血脂的藥物，如降血脂藥、避孕藥等。此外，對于體檢者，采血的季節(jié)都應(yīng)做相關(guān)記錄，因為血脂水平有季節(jié)性變動，為了前后比較應(yīng)在每年同一季節(jié)檢驗，應(yīng)囑體檢對象在抽血前24小時內(nèi)不做劇烈運動。2.2靜脈采血：除非是臥床的病人，一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內(nèi)外的分布，會影響測試項目的

3、濃度。在采血前至少應(yīng)靜坐5分鐘，一般從肘靜脈取血，使用止血帶的時間不超過1分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶。2.3抗凝劑：血漿使用EDTANa2（1mg/mL）作為抗凝劑。2.4標本處理：血標本室溫放置30min～45min后離心分離血清或血漿，在兩小時內(nèi)檢測完畢；如兩小時內(nèi)不能檢測完畢，將離心分離血清或血漿置潔凈試管加蓋2-8℃保存。3．試劑3.1試劑：本科使用湖南永和陽光科技有限責(zé)任公司APOA1試劑盒，為液體雙試劑，各組分如下：組成混合后的濃度R1:聚乙二醇<4%氯化鈉106mmol/LTris/HCL緩沖

4、液15mmol/LR2:抗人APOA-1抗體表面活性劑3.2：校準血清使用湖南永和陽光科技有限責(zé)任公司提供的40項校準血清。校準頻次：空白定標：每日需做試劑空白定標。全點定標：試劑換批號使用時或質(zhì)控結(jié)果超過規(guī)定的2SD范圍，需要全點定標。3.3試劑與校準血清的穩(wěn)定性：原包裝試劑儲存在2-8℃至標簽所示失效日期。試劑開瓶后，在儀器中至少可保存30天。試劑儲存在18-22℃穩(wěn)定28天，試劑應(yīng)避免污染。試劑R1顏色為無色，試劑R2顏色為無色至淺黃色，當(dāng)試劑變色，按照試劑失效處理。項血脂類標準液或APOA/B標準液在2

5、-8℃儲存至標簽所示失效日期，復(fù)溶后-20℃保存，可穩(wěn)定一個月，2-8℃儲存可穩(wěn)定一周，參見校準血清說明書。4．儀器KONELAB30型號儀器。性能：波長340nm，儀器測定吸光度的靈敏度應(yīng)達到0.001ABS以上。5．操作樣品為血清。本法為終點法。參數(shù)見后附，附錄A。試劑參數(shù)設(shè)置、定標操作以及樣本檢測常規(guī)操作，見儀器操作規(guī)程。6．計算△A測定C=————×C0△A標準式中：c——測定血清載脂蛋白A1濃度，g/L；△A測定——標本管吸光度；△A標準——標準管吸光度；CO——校準血清中載脂蛋白濃度，g/L；△A＝

6、A2－A17．操作性能7.1精密度：批內(nèi)CV<1.78，批間CV<3.65。7.2準確度：檢測結(jié)果的相對不準確度≤±10%。7.3靈敏度：載脂蛋白A1濃度為：1.1g/L時，濁度吸光度A340nm約1.151~1.256。7.4可報告范圍：血清與試劑用量之比為2:260:65時，測定上限為2.4g/L。7.5特異性：測量值在給定值的90%-110％范圍內(nèi)。7.6干擾：內(nèi)源性干擾物溶血為1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黃疸30mg/ml、抗壞血酸300mg/ml對測試結(jié)果無明顯影響。8．參考值1.2-

7、1.8g/L9．臨床意義載脂蛋白A1測定試劑盒用于定量測定血清中載脂蛋白A1的含量。ApoA可分為ApoAⅠ，AⅡ,AⅣ。ApoAⅠ和AⅡ大部分分布在HDL中，是HDL的主要載脂蛋白。ApoAⅠ主要存在于HDL中，在HDL3中ApoAⅠ占載脂蛋白的65％，在HDL2中ApoAⅠ占載脂蛋白的62％，在CM、VLDL和LDL中也有少量存在。血漿中呈現(xiàn)β遷移率的一種β-HDL，其內(nèi)80％為ApoAⅠ。ApoAⅠ的生理功能有：①組成載脂蛋白并維持其結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性與完整性。實驗表明，純化的ApoAⅠ在水溶液中可以自發(fā)地和脂

8、類結(jié)合。用CNBr法將ApoAⅠ裂解成四個肽段，發(fā)現(xiàn)僅有羧基末端的肽段可自發(fā)和磷脂結(jié)合。后來進一步確認這一段是ApoAⅠ224-242段，這一段既可維持雙性螺旋的結(jié)構(gòu)，又可以維持和脂質(zhì)結(jié)合所具備的疏水性。②ApoAⅠ可以激活卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶（LCAT）的活性。已經(jīng)證實，ApoAⅠ是通過激活LCAT，再催化膽固醇酯化。ApoAⅠ肽段Ⅲ（肽段116-151）是激活作用的中心。③Apo