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《shrnas對胃癌細胞系bgc-823胃泌素表達的抑制效應》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、shRNAs對胃癌細胞系BGC-823胃泌素表達的抑制效應第38卷第2期2007年4月解剖ACTAANAT0MlCASlNlCAVo1.38.No.2ADr.20o7shRNAs對胃癌細胞系BGC.823胃泌素表達的抑制效應丁一李軍擴邢文英樂曉萍張欽憲(鄭州大學醫(yī)學院組織學胚胎學教研室,河南省分子醫(yī)學重點實驗室,鄭州450052)[摘要】目的研究shRNAs對胃癌細胞系BGC一823胃泌素表達的抑制效應.方法設計4條針對胃泌素基因不同位點的寡核苷酸序列,通過體外轉(zhuǎn)錄法合成相應的shRNAs.以lOnmol/L
2、,20nmol/L,40nmol/L和80nmol/L的終濃度,將4條shRNAs分別轉(zhuǎn)染胃癌細胞BGC一823.應用原位雜交及免疫細胞化學方法檢測胃泌素表達的抑制效果,篩選最有效的shRNA.應用RT-PCR進一步驗證其對胃泌素mRNA的抑制效應.應用MTI"法檢測4條shRNAs在不同濃度下對BGC一823細胞的增殖抑制效應.結(jié)果轉(zhuǎn)染后24h,48h及72h,胃泌素表達均被明顯地抑制,并呈現(xiàn)濃度及時間依賴的趨勢.shRNA3轉(zhuǎn)染后72h,mRNA及蛋白水平表現(xiàn)出最佳的抑制效率,分別為(54.27±0.04
3、2)%和(41.69±0.038)%.RT-PCR結(jié)果顯示,shRNA3對BGC一823細胞胃泌素mRNA的抑制率為48.1%.mT結(jié)果顯示,除shRNA4處理組外,其余3組處理細胞均表現(xiàn)出濃度依賴性的增殖抑制趨勢.結(jié)論4條shRNAs在mRNA及蛋白水平均明顯地抑制了胃癌細胞BGC一823胃泌素的表達,shRNA3可能為最有效的胃泌素一shRNA.shRNA對胃泌素表達的抑制,顯著降低了BGC.823細胞增殖能力.[關(guān)鍵詞]胃泌素;shRNA;胃癌;原位雜交;逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應[中圖分類號】R735.2[
4、文獻標識碼】A[文章編號]0529—1356(2007)02—182舳ITIoNEFFECTSoFVARIoUSGASTRD.shRNAsONGASTRDEXPRESSIONINGASTRICCANCERCELLLINEBGC.823DINGYi,LIJun-kuo,XINGWen-ying,LEXiao—ping,ZHANGQin-xian(DepartmentofHistologyandEmbryology,MedicalCollege,ZhengzhouUniversltr;HenanKeyLabora
5、toryofMolecularMedicalScience,Zhengzhou450052,China)lAbstract]ObjectiveTostudytheinhibitioneffectsofvariousgastrin-shNAsongastrinexpressioningastriccancercelllineBGC一823.MethodsFournucleotidesequencesofshRNAweredesignedcorrespondingtovarioussitesofgastringe
6、ne.FourshRNAsweresynthesizedbyinvitrotranscriptionandtransfectedintogastriccancercelllineBGC一823atthefinalconcentrationof10nmol/L,20nmol/L,4Onmol/Land80nmol/Lrespectively./nsituhybridizationandimmunohistochemistrytechniqueswereappliedtoinvestigatetheinhibit
7、ionofgastrinexpressionandscreenthemosteffectiveshRNA.TheinhibitoryeffectongastrinmRNAofscreenedshRNAwasfurtheridentifiedbyRT-PCR.MTI"assaywasusedtodeterminetheinhibitoryeffectof4shRNAsatvariousfinalconcentrationsonthegrowthofBGC一823cells.ResultsThegastrinmR
8、NAandproteinexressionweresuppresseddistinctly24,48,and72houmaftertransfection,andexhibitedtime—andconcentration—dependenttendency.ThehighestsuppressionemciencyonbothmRNA(54.27±0.042)%andprotein(41.69±0
