資源描述：
《分子標記及其在植物遺傳育種中的應用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在教育資源-天天文庫。
1、分子標記及其在植物遺傳育種中的應用遺傳標記（geneticmarker）具有多型性易于鑒別與目標基因緊密連鎖性狀標記色澤，形態(tài)…細胞學標記倒位，易位，G/N/C帶…生化標記同功酶…分子標記RFLP、RAPD、SSR、AFLP、SNP……基礎-基因表達結果表現(xiàn)型DNA堿基序列變異形態(tài)標記遺傳學上穩(wěn)定、可見的外部特征---遺傳與環(huán)境、結構基因與調控基因綜合作用的結果。如穗形、芒長、穗長、粒色、穗形、矮稈、卷葉等。特點：直觀簡單從基因型到表現(xiàn)型存在基因表達、調控、個體發(fā)育等環(huán)節(jié)，表型差異有時難以反映基因型差異。細胞學標記染色體數(shù)目變異及結構變異，表現(xiàn)在染色體核型（數(shù)目、大小、隨體、著絲
2、點位置等）和帶型（C帶、N帶、G帶等）。隨著分帶、細胞原位雜交等研究技術的發(fā)展，可在染色體水平揭示更多遺傳變異。特點：直觀、快速而經濟，但變異十分有限，當染色體數(shù)目形態(tài)相似時難以分辨。生化標記——貯藏蛋白和同工酶貯藏蛋白同工酶特點：經濟、方便、成本較低結構基因表達產物，對非結構基因無能為力；所檢測位點只是基因組一部分；數(shù)量有限，有時受發(fā)育時期和環(huán)境影響。分子標記本質是以核苷酸序列作為標記，一般特點：（1）不受季節(jié)、環(huán)境、基因表達與否的限制；（2）多態(tài)性高，存在著豐富的等位變異；（3）數(shù)量豐富，多態(tài)性遍及整個基因組；（4）表現(xiàn)為“中性”，不影響目標性狀的表達，與不良性狀無必然的連鎖
3、；（5）許多分子標記表現(xiàn)共顯性，能鑒別純合雜合基因型，提供完整的信息。分子標記的分類（Staub等1996）分子標記以Southern為基礎如RFLP以PCR為基礎單引物PCR標記有RAPD、AP-PCR、DAF、ISSR等雙引物選擇性擴增PCR主要指AFLP需克隆、測序構建特殊雙引物PCR標記如SSR、STS等植物遺傳研究中常用的分子標記RFLP—RestrictionFragmentLengthPolymorphismRAPD—RandomAmplifiedPolymorphicDNAs(DAF,AP-PCR)SSR—SimpleSequenceRepeatAFLP—Ampl
4、ifiedFragmentLengthPolymorphismRFLP原理：DNA限制性內切酶酶切電泳轉移到硝酸纖維素濾膜同位素或非放射標記（如地高辛等）的探針雜交膠片放射自顯影，顯示酶切片段大小酶切：3-5ugDNA，以10U內切酶酶切5小時電泳：0.6-0.8%瓊脂糖膠70V電泳16小時染色：EtBr染色20分鐘變性：0.25MHCl20分鐘，抽真空，水冼印跡：加入0.4NNaOH，進行Southern印跡沖洗：以2×SSC冼膠，風干酶切—電泳—印跡—雜交—洗脫預雜交：將雜交膜放人預雜交液（水、5×HSB、DenhardtⅢ）中，封好后置65℃溫箱中振蕩5－6小時。雜交：預雜
5、交液中加入標記好的marker和探針，放入雜交膜浸勻。封好雜交盒后，置65℃溫箱中振蕩過夜。洗脫：將膜轉入洗脫盒，加入洗脫液65℃振蕩洗脫兩次（15min/次），吸干包好。—放射自顯影將洗脫好的雜交膜置于增感屏上,于暗室中將X-光片放于雜交膜上，再放上另一張增感屏，裝人暗袋，并用夾板夾好。置-70℃超低溫冰箱中曝光10天左右。使用磷屏儀，操作更方便。RFLP探針來源：cDNA探針與基因組DNA（gDNA）探針cDNA探針:保守性較強，探針檢測的多態(tài)性頻率較低。gDNA探針:檢測的多態(tài)性頻率較高，但不同種屬特異性較強。玉米RFLP探針：http://www.maizegdb.org
6、/probes.Html探針標記—隨機引物法25ng變性DNA5ul寡聚核苷酸2ulBSA3ul[α-32P]dCTP2ulKlenow酶加水至50ul，37℃溫箱中標記2小時RFLP標記特點共顯性，可以區(qū)別純合和雜合基因型穩(wěn)定、重復性強某些植物中開發(fā)探針已遍及整個基因組缺點：DNA需要量較大，技術復雜；用于做圖較費時，難以分析大量樣品；在基因組較大、嚴格自花授粉作物上多態(tài)性很低，使遺傳圖飽和度低。RAPD原理：用一個隨機引物（8-10bp）、堿基隨機排列的寡核苷酸序列，非定點地擴增基因組DNA，然后電泳分開擴增片段。PolymeraseChainReaction-PCR3'5'
7、5'3'TargetDNAsequenceGCTCGCAGTACTTCATGACGAGCGdenature@95?C5'3'3'5'GCTCGCAGTACTTCATGACGAGCGTCATGAGCTCGCannealprimers@60?CTaqpolymerasebinds3’andextendsGCTCGC5'3'3'5'AGTACTTCATGACGAGCGTCATGAGCTCGCDNAisdoubledwitheachcycleRepeat25-40timesRAPD的操作
