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《agilent lc色譜及色譜柱疑難解答》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、·AgilentLC色譜及色譜柱疑難解答出現(xiàn)倒峰的原因：1.常為溶劑峰,流動(dòng)相的紫外吸收大于樣品的溶劑的紫外吸收,就產(chǎn)生倒峰.2.樣品中的雜質(zhì)沒(méi)有紫處吸收或吸收很小,而流動(dòng)相紫外吸收大,如用甲醇時(shí)波長(zhǎng)設(shè)定在220nm以下時(shí),常出現(xiàn)這種現(xiàn)象.3.進(jìn)樣過(guò)程中進(jìn)入了空氣也會(huì)導(dǎo)致的.4.如果流動(dòng)相有紫外吸收的雜質(zhì)，使用紫外檢測(cè)器時(shí)，會(huì)產(chǎn)生倒峰，必須用高純度的溶劑作為流動(dòng)相。5.檢測(cè)器的極性接反了，也會(huì)出現(xiàn)倒峰。第一，用的是什么檢測(cè)器？如果是示差折光，那很正常；第二，倒峰在什么位置？如果是溶劑峰，也很正常，要去除的話，溶劑改用流動(dòng)相；第三，如果是紫外檢測(cè)器（MW
2、D,ORDAD）,有沒(méi)有加參比波長(zhǎng)？如果有，去掉參比波長(zhǎng)或另選合適的參比波長(zhǎng)；第四，如果是紫外檢測(cè)器，流量池里是否有氣泡產(chǎn)生？1.抽濾或超聲去除流動(dòng)相里的氣泡；2.檢查在線脫氣機(jī)（如果有的話）；3.調(diào)節(jié)背壓；第五，流動(dòng)相是否在該波長(zhǎng)（用紫外檢測(cè)器的話）有較大的背景？1.檢查你用的溶劑的等級(jí)；2.檢查色譜條件的合理性。我認(rèn)為是參比波長(zhǎng)設(shè)置的問(wèn)題，試著換個(gè)參比波長(zhǎng)看看多半是因?yàn)闃悠返模校戎蹬c流動(dòng)相的ＰＨ值不一致造成的，解決辦法：加大鹽的濃度，用流動(dòng)相溶解樣品即可．流動(dòng)相背景吸收波長(zhǎng)低于檢測(cè)波長(zhǎng)1.????組分的吸收小于流動(dòng)相的背景吸收，可能原因是流動(dòng)相中加
3、入截止波長(zhǎng)較大的成分或波長(zhǎng)選擇不合適2.二極管陣列檢測(cè)器中參比波長(zhǎng)處吸收大于組分吸收；１、????首先確定是還是柱還是檢測(cè)器的問(wèn)題：換下柱看是否仍存在倒峰，如果不行再換檢測(cè)器，以確定是否檢測(cè)器或者柱的問(wèn)題?；蛘呤裁炊疾灰獡Q單純換個(gè)其他化學(xué)成分，看是否是因?yàn)槟愕臉悠反嬖趩?wèn)題。2、如果都做了，還是不行，就考慮是否流動(dòng)相問(wèn)題，一般DAD存在有規(guī)律倒峰的現(xiàn)象還真的不是很好解釋，看您意思好象是倒峰只是跟著你的主成分走，這樣你可以首先進(jìn)個(gè)空白溶劑樣品，看是否還有倒峰存在，如果空白樣品沒(méi)有倒峰那么就是你樣品問(wèn)題，是否你樣品處理的有問(wèn)題，一般液相對(duì)流動(dòng)相的PH控制在大
4、概2.5-7.5范圍，如果過(guò)酸或過(guò)堿會(huì)導(dǎo)致填料被破壞引起成分在柱上的洗拖保留發(fā)生變化而導(dǎo)致規(guī)律倒峰出現(xiàn)也有可能，測(cè)下您的流動(dòng)相PH以保證這個(gè)沒(méi)問(wèn)題。樣品中殘留的一點(diǎn)酸或堿應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題，因?yàn)樗釅A在柱上基本沒(méi)有保留，且量小應(yīng)該沒(méi)影響倒峰的出現(xiàn)，我個(gè)人認(rèn)為是色譜柱的殘余硅羥基所致，同一個(gè)色譜條件，我曾經(jīng)分別用非端基封尾柱和端基封尾柱考察，前者即便是進(jìn)流動(dòng)相也會(huì)出現(xiàn)負(fù)峰，后者則沒(méi)有，推斷應(yīng)為殘余硅羥基對(duì)進(jìn)樣樣品中的部分離子造成吸附，使進(jìn)樣部分的液體與流動(dòng)相產(chǎn)生差異，由于溶質(zhì)離子經(jīng)過(guò)檢測(cè)器時(shí)，紫外吸收信號(hào)減小，所以形成負(fù)方向的色譜峰。1.樣品引入2.樣品與流動(dòng)相反
5、應(yīng)所致3.檢測(cè)條件不合適,建議換二極管陣列查找4.外部引入的污染??最后一點(diǎn)幾率很小,但也會(huì)存在的,就是儀器設(shè)備的系統(tǒng)誤差··如何避免基線飄移？基線向上飄移表明系統(tǒng)中有污染。請(qǐng)沖洗色譜柱，凈化樣品，然后使用新溶劑。向下飄移通常是由于檢測(cè)室或柱箱中的溫度波動(dòng)的原因。減小室溫變化，將儀器從通風(fēng)櫥中取出，并將色譜柱和毛細(xì)管保溫隔熱。向下飄移也可能由于溶劑的純度不是HPLC級(jí)別的溶劑而且此純度低的溶劑在紫外有吸收?！と绾螠p少基線噪音？無(wú)規(guī)律噪音可能與污染有關(guān)。請(qǐng)沖洗色譜柱，對(duì)樣品做合適的前處理以避免污染，并使用HPLC級(jí)別的溶劑。連續(xù)噪音有可能由檢測(cè)器或泵造成
6、。要確定問(wèn)題是否發(fā)生在檢測(cè)器還是在泵，請(qǐng)先關(guān)泵停掉流量，監(jiān)測(cè)基線。如果此時(shí)基線平穩(wěn)，則噪音可能與泵有關(guān)系。使用ChemStation在線診斷或LC手持控制器檢查泵方面的故障。如果停泵后噪音繼續(xù)存在，則說(shuō)明噪音與檢測(cè)器有關(guān)。首先，請(qǐng)嘗試更換燈。如果問(wèn)題依然存在，則請(qǐng)與安捷倫科技公司聯(lián)系。在中國(guó)，請(qǐng)撥打8008203278?！な裁丛?qū)е禄€毛刺？這很有可能是流動(dòng)池內(nèi)有氣泡。請(qǐng)先停泵來(lái)進(jìn)行確認(rèn),如果毛剌消失，則很有可能是由于流動(dòng)池內(nèi)有氣泡。需要沖洗流動(dòng)池。如果毛剌仍然存在，則需檢查檢測(cè)器本身的電噪音有關(guān)。如果需要更多幫助，則請(qǐng)致電安捷倫科技公司。在中國(guó)，請(qǐng)
7、撥打8008203278?！な裁丛?qū)е禄€波動(dòng)？基線波動(dòng)有可能與實(shí)驗(yàn)室的溫度及濕度變化有關(guān)系。需確保室溫及濕度穩(wěn)定，將儀器從通風(fēng)櫥中取出，并將色譜柱和毛細(xì)管進(jìn)行隔熱保溫。·我的色譜圖上的峰有拖尾現(xiàn)象。如何改善峰形？可能的原因：1.系統(tǒng)內(nèi)的死體積大2.樣品在色譜柱上有吸附3.色譜柱適用時(shí)間很長(zhǎng)建議用戶：1.盡量減少流動(dòng)相管線的死體積，確保管線接頭的連接合適減小死體積，由于不同生產(chǎn)廠家的管線的接頭和密封墊圈有可能不一樣，盡量使用安捷倫公司的管線接頭和密封墊圈。2.使用洗脫更強(qiáng)的流動(dòng)相3.更換新色譜柱·如何排除流動(dòng)相中的氣泡？如何排出流動(dòng)池中的氣泡？避免流
8、動(dòng)相中產(chǎn)生氣泡的最佳方式是將流動(dòng)相經(jīng)脫氣裝置進(jìn)行脫氣。如果沒(méi)有脫氣裝置，則可以在流動(dòng)相溶劑瓶中
