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1、HPLC測定地椒草中木犀草素含量貴州安順職院,貴州安順561000【摘要】:目的:建立地椒草中木犀草素含量測定的HPLC方法;方法:DiamonsilC18(5μm,250×4.6i.d.mm,迪馬公司);流動相:甲醇-水-磷酸(60?40?0.4);流速:1ml/min;溫度:35℃;檢測波長為350nm;結(jié)果:木犀草素在100.12~800.96ng范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系,r=0.9999,地椒草藥材平均回收率為97.95%,RSD為0.97%;結(jié)論:HPLC測定地椒草中木犀草素結(jié)果準確可靠,快速,靈敏,重現(xiàn)性好｡【關(guān)鍵詞】:地椒草;木犀草素;高效液相色譜法;含量測定
2、【中圖分類號】R927.2【文獻標識碼】B【文章編號】1007-8517(2009)03(上)0029-02地椒草Thymus6vulgaris[1]為唇形科地椒草屬植物,主要分布于西藏､青海等省,為藏族和蒙古族等民間傳統(tǒng)常用草藥｡具有消炎止痛,活血化淤等功效,用于治療跌打損傷,筋骨疼痛,骨質(zhì)松炎等癥[2,3]｡主要含有黃酮類[4]､環(huán)烯醚萜類[5]成分｡目前尚未見有關(guān)地椒草中指標性成分木犀草素含量測定方法的報道｡本文建立了地椒草中木犀草素的HPLC含量測定方法及測定了不同批次藥材中其含量｡1儀
3、器和材料高效液相色譜儀:LC-10ATvp泵(美國),SPD-10Avp紫外檢測器(美國),CTO-10Asvp柱溫箱(美國);ShimadzuLibrorAEL40SM(十萬分之一)天平(日本島津所)｡色譜甲醇(天津市科密歐化學試開發(fā)中心);水(重蒸餾,臨用前制備);木犀草素對照品(中國生物制品鑒定所,批號:111520-200201)樣品三批(批號:20040101､20040102､20040103)2方法與結(jié)果色譜條件色譜柱:DiamonsilC18(5μm,250×4.6i.d.mm,迪馬公司);流動相:甲醇-水-磷酸(60∶40∶0.4)
4、;流速:1ml/min;溫度:35℃;檢測波長為350nm｡在此條件下,藥材中木犀草素與其他成分能很好地分離｡以工作站中的色譜峰純度分析和光譜匹配對照對所得色譜圖進行分析｡結(jié)果地椒草藥材中木犀草素峰的純度角(PurityAngle)為0.846,閾值(Threshold)為1.914;光譜匹配角(MatchAngle)為0.384,閾值(MatchThreshold)為1.838,在210~400nm范圍內(nèi)與對照品有很好的光譜匹配｡對照品溶液的配制6精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的木犀草素對照品適量,加甲醇制成每1ml含木犀草素40μg
5、的溶液,即得｡線性范圍的考察精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的木犀草素對照品10.12mg置100ml棕色容量瓶中,加甲醇使溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成每1ml含木犀草素100.12μg的對照品儲備液;精密吸取該液2.5､5､10､15､20ml,置25ml棕色容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,制成每1ml含木犀草素10.012､20.024､40.048､60.072､80.096μg的系列對照品溶液,分別精密吸取上述系列對照品溶液各10μl,注入高效液相色譜儀,按上
6、述色譜條件測定峰面積,記錄色譜圖,測定結(jié)果見表1,并以對照品進樣量X(ng)為橫坐標,峰面積值Y(mv.s)為縱坐標,繪制標準曲線,結(jié)果表明,木犀草素在100.12~800.96ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好｡精密度試驗精密吸取對照品溶液10μl,重復進樣5次,測定木犀草素峰面積積分值,求出相對標準偏差,結(jié)果表明,木犀草素進樣精密度良好,RSD=0.65%｡2.1重復性試驗取地椒草6藥材(批號:20040103)粉末各2g,共5份,按地椒草藥材供試液的制備方法制備供試液｡精密吸取供試品溶液各10μl,注入高效液相色譜儀,測定木犀草素峰面積積分值,計算含量,求
7、相對標準偏差;結(jié)果表明此方法測定木犀草素的重現(xiàn)性良好,RSD=1.09%｡2.2穩(wěn)定性試驗取地椒草藥材(批號:20040103)粉末2g,按地椒草藥材供試液的制備方法制備供試液,在室溫下按表4規(guī)定時間進樣,測定木犀草素峰面積值,求相對標準偏差;結(jié)果表明,木犀草素在24小時內(nèi)基本穩(wěn)定,RSD=0.84%｡2.3回收率試驗采用加樣回收試驗,取已知含量的重現(xiàn)性試驗的同一批樣品(批號:20
