動員人外周血巨核祖細(xì)胞體外擴(kuò)增的研究

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1、動員人外周血巨核祖細(xì)胞體外擴(kuò)增的研究作者：夏婷，方建培，吳燕峰，徐宏貴，魏菁【摘要】?本研究探討多種細(xì)胞因子組合的幾種培養(yǎng)體系涅對人外周血CD34+細(xì)胞體外誘導(dǎo)擴(kuò)增ｕ生成巨核細(xì)胞的作用，研究人外周血來源唱的巨核細(xì)胞體外擴(kuò)增的最佳細(xì)胞因子組合惴及培養(yǎng)時(shí)間。用Ficoll-Hapa爛que分離法分離動員的外周血單個(gè)核細(xì)ㄝ胞，免疫磁珠法分離純化CD34+細(xì)胞憐，并將其在含胎牛血清的液體培養(yǎng)體系中、各組細(xì)胞因子誘導(dǎo)下培養(yǎng)15天。在不毯同時(shí)間點(diǎn)采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)│，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測培養(yǎng)體系中CD4挑1+細(xì)胞的含

2、量；同時(shí)采用甲基纖維素半邊固體培養(yǎng)法進(jìn)行巨核細(xì)胞集落培養(yǎng)，測定∩巨核細(xì)胞集落形成單位的數(shù)量。結(jié)果表明馭：經(jīng)過15天的培養(yǎng)，在MPB來源的C烊D34+細(xì)胞體外誘導(dǎo)并擴(kuò)增巨核祖細(xì)胞其體系中，以TPO/FL/IL-6/I饕L-3組合的擴(kuò)增效果最好，明顯高于其它3組，CD41+細(xì)胞第5天、10天源分別擴(kuò)增了±倍、±倍。第15天CD4坭1+細(xì)胞含量及CD41+細(xì)胞數(shù)迅速下膚降。CFU-MK產(chǎn)率第5天、10天分迫別為±個(gè)、±個(gè)，明顯高于其余3組。結(jié)囀論：以TPO/FL/IL-6/IL-撫3因子組合為體外誘導(dǎo)擴(kuò)增巨核祖細(xì)胞的指

3、最佳組合，動員外周血的巨核祖細(xì)胞體外蕊誘導(dǎo)擴(kuò)增以培養(yǎng)第10天為宜。本實(shí)驗(yàn)建廚立了動員人外周血來源的巨核祖細(xì)胞體外漩擴(kuò)增體系。11/11【關(guān)鍵詞】?動員人外周血贓；巨核祖細(xì)胞;體外擴(kuò)增；Exviv┙oExpansionofMegaka賃ryocyticProgenitorsfromMobilizedHuma潁nPeripheralBloodA疾bstractThis?studyw蜣asaimed?toinvestig止atetheeffectofsome?culturesystemcomp瀲asedofvario

4、uscytok戚inecombinations(TP匙O，SCF，F(xiàn)L，IL-1，IL-3鰭，IL-6)onexvivo?exp彬ansionofmegakaryocyticprogenitors??iメnduccedfromCD34+ce癱llsofperipheralblo遷odandtoseekaoptima蠖lcytokinecombinati鴕onandculturetime.Mononuclear??cellsw菁ereisolatedfrommob硐ilized?peripheralb勛lood?

5、(MPB)bydensitygradientcentrifug糶ationoverFicoll.?C老D34+cellswerepurif姣iedby?usingan?immu特nomagneticbeadsepa靜rationsystem.These啖lectedCD34+cellswe墜reseededinIscove′s儻modifiedKulbecco′smedium(IMDM)supple倩mentedwithfetalcal陴fserum(FCS)andvarious?kindsofcytokin

6、偵es.After15daysofculture，thecontentof礬CD41+cells?incultu窕resystemweredeterminedbyflowcytometr吆y，andthenumberofmegakaryocytecolony-草formingunit(CFU-MK11/11垛)wasmeasuredsimultaneously.Theresult詳sshowedthatafterde骱finiteddaysofcultu蟣re，thecytokinecomb攬ination

7、TPO/FL/IL-6/IL-3wasthemostsui奮tableforMPBtoobtai筘nhighnumberofMK，an窨dbetterthananyothe猙rthreegroups.TheincreasemultipleofCD膠41+cellswas±onday5啪and±?onday10.Onday挲15，theproportionan腥dtheincrease?multi妃pleofCD41+cellsdec嘯reasedobviously.Th。eexpansionmultiple鈮s

8、?ofCFU-MKwere?±?o娜nday5and±?onday10，革higherthananyother黍groups.Itisconcludedthat?TPO/FL/IL-6騎/IL-3combinationwasthebest?optimalfo喵rexpansionexvivo??兢ofmegakaryocytic?pЫrogenitors