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《高效液相色譜法同時測定食品中苯甲酸山梨酸脫氫乙酸的步驟》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、高效液相色譜法同時測定食品中苯甲酸山梨酸脫氫乙酸的步驟1材料與方法：1.1儀器：(1)高效液相色譜儀(2)分析天平，(3)酸度計，(4)離心機，(5)振蕩器，(6)超純水儀；試劑：(1)苯甲酸，(2)山梨酸，(3)脫氫乙酸，(4)甲醇；提取試劑：(1)0.3%鹽酸乙醇溶液,(2)0.02mol/L磷酸氫二鉀溶液1.2標準溶液的配制精密稱取苯甲酸，山梨酸，脫氫乙酸對照品各適量，加乙醇溶解，配制成1.0mg/ml的標準儲備溶液。1.3色譜參數(shù)和條件（1）色譜柱：DIONEXAcclaim120C18(4.6*250mm,5μm)（2）流動相：甲醇—0.02m
2、ol/L磷酸氫二鉀溶液（10:90）（3）流速：1.0ml/min（4）進樣量：10μL（5）檢測波長：230nm(苯甲酸，山梨酸)，293nm（脫氫乙酸）1.4樣品處理1.4.1固體樣品（如熟肉制品.豆制品及糕點類）（1）稱取搗碎混勻的樣品5g(精確至0.01g)于具塞三角瓶中，（2）精密加入25ml提取溶劑，振蕩1h后，于4℃放置24h，（3）離心，取上清液3ml，用水定量稀釋至10ml，離心，經(jīng)0.45μm濾膜過濾，（4）進液相色譜儀分析。1.4.2液體樣品(如冷凍飲品)（1）將樣品于室溫下解凍后，稱取10g(精確至0.001g)于25ml量瓶中，
3、（2）用提取溶劑定容至刻度，混勻，于4℃放置24h，（3）離心，取上清液3ml，用水定量稀釋至10ml，離心，經(jīng)0.45μm濾膜過濾，（4）進液相色譜儀分析。2數(shù)據(jù)處理2.1標準曲線與檢出限精密量取標準儲備溶液適量，用提取溶劑定量稀釋制成每ml中含0.1μg,0.5μg,1μg,4μg,8μg,12μg,16μg,20μg的標準混合溶液，按前述色譜條件進行測定，且每個濃度做兩組平行試驗，以濃度C(μg/ml)為橫坐標，峰面積A為縱坐標制作標準曲線；標準混合溶液的濃度（μg/ml）0.10.5148121620峰面積以濃度C(μg/ml)對峰面積A進行線性
4、回歸，按信噪比3，計算檢出限2.2精密度和方法回收率試驗（1）精密度實驗：取同一對照品溶液(各濃度均為10μg/ml)，重復進樣，測出各峰面積的RSD值。相對標準偏差(relativestandarddeviationRSD)，又稱為變異系數(shù)（Coefficientofvariation,C.V.），通常用百分數(shù)表示用來評價定量分析結果精密度的量度，是對同一樣品多次測定結果的重復性和再現(xiàn)性的評價。本實驗采取8次樣品的結果測定而計算最后測得數(shù)據(jù)的RSD。RSD計算如下公式：其中：——標準偏差(StdDev,StandardDeviation)——n次測定值
5、的算術平均值精密度的測定通過測定多組數(shù)據(jù)而測定標準偏差來評價，本方法通過測定10μg/ml的對照品溶液測定9組，且每組做2個平行；樣品名峰面積(μS*min)濃度(mg/L)精密度10μg/ml-1精密度10μg/ml-1精密度10μg/ml-2精密度10μg/ml-2精密度10μg/ml-3精密度10μg/ml-3精密度10μg/ml-4精密度10μg/ml-4精密度10μg/ml-5精密度10μg/ml-5精密度10μg/ml-6精密度10μg/ml-6精密度10μg/ml-7精密度10μg/ml-7精密度10μg/ml-8精密度10μg/ml-8精
6、密度10μg/ml-9精密度10μg/ml-9將每兩組平行實驗結果取平均值且通過計算出來的平均值通過excel計算出其標準偏差s樣品名各組平行實驗濃度平均值(mg/L)平均值標準偏差精密度10μg/ml-1精密度10μg/ml-2精密度10μg/ml-3精密度10μg/ml-4精密度10μg/ml-5精密度10μg/ml-6精密度10μg/ml-7精密度10μg/ml-8精密度10μg/ml-9=（2）回收率實驗：準確度的計算通過測定加標回收率,配制一定濃度水平的混合標準溶液，按8mg/kg,10mg/kg,12mg/kg的量加入樣品中,且每個濃度做3組
7、，每組均做2個平行試驗，使數(shù)據(jù)更為精準。按1.4方法處理，做回收率試驗樣品名峰面積(μS*min)濃度(mg/L)回收率8mg/kg-1回收率8mg/kg-1回收率8mg/kg-2回收率8mg/kg-2回收率8mg/kg-3回收率8mg/kg-3回收率10mg/kg-1回收率10mg/kg-1回收率10mg/kg-2回收率10mg/kg-2回收率10mg/kg-3回收率10mg/kg-3回收率12mg/kg-1回收率12mg/kg-1回收率12mg/kg-2回收率12mg/kg-2回收率12mg/kg-3回收率12mg/kg-3未加標0.0000.000
8、0準確度的評價通過測定回收率的方法，將被測樣品分為兩份，其中一份加入已知量的欲測
