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1、紫杉醇改變FADD在食管鱗癌中表達(dá)【摘要】目的研究紫杉醇對(duì)人食管鱗癌細(xì)胞株Eca?109中Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白(Fasassociateddeathdomainprotein,FADD)表達(dá)的影響,探討紫杉醇在食管鱗癌治療中的作用機(jī)制。方法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度紫杉醇處理下，人食管癌細(xì)胞株Eca?109細(xì)胞凋亡率，同時(shí)采用Westernblotting分析細(xì)胞中FADD的表達(dá)變化。結(jié)果紫杉醇誘導(dǎo)人食管癌細(xì)胞株Eca?109細(xì)胞凋亡呈劑量依賴性;隨著紫杉醇劑量的增加，實(shí)驗(yàn)組Eca?109細(xì)胞中FADD表達(dá)呈
2、顯著增高。結(jié)論一定劑量的紫杉醇可以提高FADD在食管癌細(xì)胞中的表達(dá)、促進(jìn)食管癌細(xì)胞的凋亡，這可能是紫杉醇治療食管癌的分子機(jī)制之一。?【關(guān)鍵詞】紫杉醇;食管癌;凋亡;FADD??ExpressionOfFADDinducedbyPaclitaxelInEsophagealSquamousCellCarcinomaWANGHong?mei，YANGYu?bai.TheCangxiPepole’sHospital,SichuanGuangyuan628400,China?【Abstract】ObjectiveToo
3、bservethechangesofFADDexpressioninesophagealcarcinomacell8109(Eca109)inducebyPaclitaxel.MethodsWithdifferentconcentrationofpaclitaxel,theapoptosisratesofEca109cellsandproteinexpressionlevelsofFADDinEca109cellsweredetected.ResultsTheapoptosisratesofEca109cel
4、lswereincreasedwithconcentrationofpaclitaxelrising,andproteinexpressionlevelsofFADDinEca109cellswereincreasesimultaneously.ConclusionPaclitaxelinducedEca109cellapoptosisviachangingproteinexpressionlevelsofFADD.?【Keywords】Paclitaxel;Esophagealcarcinoma;Apopt
5、osis;FADD?食管癌是常見(jiàn)消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)病隱匿,確診時(shí)大多已屬于中晚期，使很多患者在手術(shù)前后需要接受化學(xué)治療,以確保手術(shù)效果，同時(shí)化療也為很多失去手術(shù)機(jī)會(huì)的患者提供了治療的機(jī)會(huì)。紫杉醇品名為T(mén)axol，最早是Wall和Wani于1963年從太平洋紅豆杉的皮中提取得到［1］，經(jīng)過(guò)臨床試驗(yàn)后近年來(lái)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床包括食管癌在內(nèi)的多種腫瘤的化療中。紫杉醇可作用于細(xì)胞凋亡受體途徑的Fas/FasL8通路或激活凋亡啟動(dòng)途徑的半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶系統(tǒng)(caspases),誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［2,3］，而F
6、ADD是Fas/FasL凋亡系統(tǒng)中的必需分子，不僅參與細(xì)胞凋亡過(guò)程的發(fā)生，還與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)有關(guān)。研究［4］證實(shí)從食管正常黏膜到不典型增生的組織中，F(xiàn)ADD蛋白及mRNA表達(dá)呈現(xiàn)顯著下降趨勢(shì)。已有臨床研究［5,6］表明紫杉醇聯(lián)合順鉑、奈達(dá)鉑、氟尿嘧啶等藥物治療食管癌,可以提高其總有效率,且毒副作用無(wú)明顯增加，患者耐受性較好，表明紫杉醇在食管癌治療中具有很高的臨床應(yīng)用價(jià)值。同時(shí)紫杉醇對(duì)人食管癌細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用,使細(xì)胞分裂阻滯于G2-M期,并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡［7］。但現(xiàn)有研究并沒(méi)有對(duì)這一過(guò)程中食管癌細(xì)胞
7、中FADD的表達(dá)變化情況作進(jìn)一步研究。?作者通過(guò)檢測(cè)不同濃度紫杉醇誘導(dǎo)人食管鱗癌細(xì)胞株Ec-109細(xì)胞凋亡,并檢測(cè)細(xì)胞表達(dá)FADD蛋白的變化情況，探討紫杉醇抑制人食管癌細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制,為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。?1材料和方法?1．1試劑與藥物泰素(紫杉醇的商品名,由百時(shí)美施貴寶公司惠供,6g/L,分子質(zhì)量853?9u)，RPMI1640培養(yǎng)液、0?05%的胰蛋白酶及小牛血清為Hyclone產(chǎn)品,AnnexinV（FITC）/PI凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)于杭州隆基生物工程研究所,蛋白提取液購(gòu)于Pierc
8、e公司，兔抗人FADD單克隆抗體及鼠抗人β-actin單克隆抗體購(gòu)于Santa8Cruz公司，考馬斯亮藍(lán)試劑盒購(gòu)于南京建成生物科技有限公司。?1．2細(xì)胞與細(xì)胞培養(yǎng)人食管癌細(xì)胞株Eca-109（ATCC）由上海麥莎生物科技有限公司代購(gòu)。細(xì)胞接種于含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng),生長(zhǎng)于37℃含5%的CO?2孵箱中,待細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。胰蛋白酶消化細(xì)胞后培養(yǎng)基重懸，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為5
