標(biāo)準(zhǔn)_核糖核酸酶和脫氧核糖核酸酶純度檢測(cè)方法（編制說(shuō)明）

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1、標(biāo)準(zhǔn)_核糖核酸酶和脫氧核糖核酸酶純度檢測(cè)方法（編制說(shuō)明）核糖核酸酶和脫氧核糖核酸酶純度檢測(cè)方法編制說(shuō)明（征求意見(jiàn)稿）一、任務(wù)來(lái)源本國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的制定任務(wù)列入國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)《二О一五年國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)制修訂項(xiàng)目》，項(xiàng)目編號(hào)“20154060-T-424”。本項(xiàng)任務(wù)由中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院提出并歸口，定于2016年完成。本標(biāo)準(zhǔn)起草工作組由中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院、浙江工商大學(xué)、河北農(nóng)業(yè)大學(xué)等單位共同組成。二、目的及意義核酸分解的第一步是水解核苷酸之間的磷酸二酯鍵，在高等動(dòng)植物中都有作用于磷酸二酯鍵的核酸酶，其本質(zhì)均是蛋白質(zhì)。但是不同來(lái)源

2、的核酸酶，其專一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于底物RNA，通常稱為核糖核酸酶（RNase），有些核酸酶只能作用于底物DNA，稱為脫氧核糖核酸酶（DNase），核糖核酸酶和脫氧核糖核酸酶統(tǒng)稱為核酸酶（Nuclease）。核糖核酸酶是一類廣泛存在于動(dòng)植物體內(nèi)的核酸水解酶，從20世紀(jì)60年代以來(lái)一直作為一種模型蛋白被普遍用于分子生物學(xué)研究。RNase家族包括RNaseA、RNaseB、RNaseC、RNaseH、S-RNase、RNaseP、RNaseT等，主要生理功能是控制細(xì)胞內(nèi)RNA的種類與數(shù)量分布，

3、除參與核糖核酸轉(zhuǎn)錄后的剪切、修飾和降解等過(guò)程外，還與某些植物的自交不親和性、器官發(fā)生、宿主的防御機(jī)制、控制腫瘤血管生成、殺滅腫瘤細(xì)胞及抑制病毒復(fù)制等有關(guān)。其中核糖核酸酶A一般被認(rèn)為是核糖核酸酶的典型代表，分子量約為13.64kDa，通過(guò)X射線衍射和質(zhì)譜分析結(jié)果表明，它的空間結(jié)構(gòu)呈腎形分布，見(jiàn)圖1。脫氧核糖核酸酶是將單鏈或雙鏈DNA同等程度地隨機(jī)分解，生成具有5'-P末端寡核苷酸的脫氧核糖核酸內(nèi)切酶。脫氧核糖核酸酶的主要用途包括制備不含DNA的RNA樣品；RT-PCR反應(yīng)前RNA樣品中去除基因組DNA等可能的DNA

4、污染；體外T7,～15/15～標(biāo)準(zhǔn)_核糖核酸酶和脫氧核糖核酸酶純度檢測(cè)方法（編制說(shuō)明）T3,SP6等RNAPolymerases催化的RNA轉(zhuǎn)錄后去除DNA模板；DNaseIFootprinting研究DNA-蛋白質(zhì)相互作用；缺口平移（Nicktranslation）；產(chǎn)生DNA隨機(jī)片段文庫(kù)；細(xì)胞凋亡TUNEL檢測(cè)中部分剪切基因組DNA作為陽(yáng)性對(duì)照等。脫氧核糖核酸酶I一般被認(rèn)為是脫氧核糖核酸酶的典型代表，分子量約32kDa。由于核酸酶（核糖核酸酶和脫氧核糖核酸酶）具有重要的生理學(xué)作用，引起了廣泛的關(guān)注。目前已經(jīng)商

5、業(yè)化生產(chǎn)和銷售，但是作為核酸酶的重要質(zhì)量指標(biāo)之一的酶的純度，根據(jù)文獻(xiàn)調(diào)研顯示相應(yīng)的測(cè)定方法目前仍然沒(méi)有形成統(tǒng)一的檢測(cè)和分析標(biāo)準(zhǔn)，各生產(chǎn)和銷售廠商對(duì)其純度的質(zhì)量控制各自定義，甚至有些廠商僅是標(biāo)明了核酸酶的蛋白含量，混淆了核酸酶的純度概念。這實(shí)際上已經(jīng)成為核酸酶產(chǎn)品可持續(xù)發(fā)展的瓶頸問(wèn)題，給消費(fèi)者造成了極大的不便。鑒于此，開展核酸酶純度檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)的制定，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義，可有助于規(guī)范市場(chǎng)上此類產(chǎn)品的亂象，切實(shí)保障消費(fèi)者的使用。經(jīng)濟(jì)全球化浪潮使標(biāo)準(zhǔn)競(jìng)爭(zhēng)上升到了戰(zhàn)略地位，特別是進(jìn)入21世紀(jì)以后，發(fā)達(dá)國(guó)家紛紛制定各自的標(biāo)

6、準(zhǔn)化發(fā)展戰(zhàn)略，以應(yīng)對(duì)因經(jīng)濟(jì)全球化對(duì)自身帶來(lái)的影響。此外，此類標(biāo)準(zhǔn)的制定也同樣滿足《國(guó)家中長(zhǎng)期科學(xué)和技術(shù)發(fā)展規(guī)劃綱要（2006-2020年）》中明確把實(shí)施技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)戰(zhàn)略作為我國(guó)科技發(fā)展的兩大戰(zhàn)略之一的目標(biāo)，有助于保障國(guó)家科學(xué)發(fā)展。圖1牛胰腺核糖核酸酶A空間結(jié)構(gòu)三、標(biāo)準(zhǔn)制定原則及主要內(nèi)容（一）標(biāo)準(zhǔn)編制原則～15/15～標(biāo)準(zhǔn)_核糖核酸酶和脫氧核糖核酸酶純度檢測(cè)方法（編制說(shuō)明）標(biāo)準(zhǔn)的制定過(guò)程中采用文獻(xiàn)調(diào)查法、專家座談法、凝膠電泳方法等多種研究方法，方法科學(xué)先進(jìn)、過(guò)程周密嚴(yán)謹(jǐn)、數(shù)據(jù)真實(shí)可信、結(jié)果明確。本標(biāo)準(zhǔn)是為相關(guān)組織核糖核

7、酸酶和脫氧核糖核酸酶純度檢測(cè)提供技術(shù)支撐，考慮到生產(chǎn)、監(jiān)管等不同需求，在方法選擇上，主要基于現(xiàn)狀、現(xiàn)有成熟的技術(shù)以及結(jié)果及驗(yàn)證基礎(chǔ)確定的，因此實(shí)用性較強(qiáng)。（二）標(biāo)準(zhǔn)制訂主要依據(jù)1、標(biāo)準(zhǔn)編寫遵循GB1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則》的有關(guān)要求。2、標(biāo)準(zhǔn)編寫內(nèi)容參考了與核酸酶純度檢測(cè)相關(guān)文獻(xiàn)，標(biāo)準(zhǔn)參照了GB/T6379.1-2004《測(cè)量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度（正確度與精密度）》第1部分總則與定義和GB/T6379.2-2004《測(cè)量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度》第2部分確定標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量方法重復(fù)性與再現(xiàn)性

8、的基本方法。（三）本標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容本標(biāo)準(zhǔn)主要包括以下7個(gè)部分：（1）范圍；（2）術(shù)語(yǔ)和定義；（3）原理；（4）儀器設(shè)備及器具；（5）主要試劑；（6）分析步驟；（7）結(jié)果分析等。四、主要工作過(guò)程（一）組成標(biāo)準(zhǔn)起草小組根據(jù)國(guó)家制修訂有關(guān)程序和要求，2015年10～15/15～標(biāo)準(zhǔn)_核糖核酸酶和脫氧核糖核酸酶純度檢測(cè)方法（編制說(shuō)明）月下旬，中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院主持召開了《核酸酶純度