豆類絲核菌論文:豆類絲核菌發(fā)酵液中苦馬豆素的提取及其體外抑菌活性試驗(yàn)和對(duì)新城疫疫苗免疫效果的影響

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1、豆類絲核菌論文:豆類絲核菌發(fā)酵液中苦馬豆素的提取及其體外抑菌活性試驗(yàn)和對(duì)新城疫疫苗免疫效果的影響【中文摘要】:改進(jìn)從豆類絲核菌發(fā)酵液中提取分離苦馬豆素的方法;對(duì)發(fā)酵液不同極性溶劑的萃取物進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)的研究;對(duì)3.2871A豆類絲核菌菌株發(fā)酵液在雛雞免疫功能方面的影響進(jìn)行研究。方法:1.豆類絲核菌保藏與移接,用馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基,發(fā)酵培養(yǎng)用改良的查氏(Czapek’s)培養(yǎng)基,溫度25℃,溫箱培養(yǎng)14d,收集發(fā)酵液并對(duì)其進(jìn)行預(yù)處理。采用減壓濃縮、分段萃取、D101大孔樹(shù)脂吸附、硅膠柱層析、冷凍干燥、減壓升華等方法從發(fā)酵液中提取分離SW,薄層色譜適

2、時(shí)監(jiān)測(cè),薄層色譜、氣相色譜對(duì)分離產(chǎn)物進(jìn)行鑒定分析。2.采用紙片擴(kuò)散法與試管稀釋法,選用金黃色葡萄球菌(Staphyloccocusaureus)、大腸埃希菌(Escherichiacoli)、無(wú)乳鏈球菌(S.agalactiae)、李斯特菌(L.monocytogenes)、蠟狀芽孢桿菌(Bacilluscereus)對(duì)發(fā)酵液各段萃取物進(jìn)行定性體外抑菌試驗(yàn),然后根據(jù)定性體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果再進(jìn)行定量體外抑菌試驗(yàn),測(cè)定各段萃取物的最低抑菌濃度(MIC)。3.研究豆類絲核菌發(fā)酵液對(duì)雛雞免疫功能的影響時(shí),在雛雞免疫新城疫疫苗前、后3天對(duì)其注射SW含量為(1、2、4mg·k

3、g-1)3種劑量的豆類絲核菌發(fā)酵液,通過(guò)測(cè)定雛雞的抗體效價(jià)、免疫器官指數(shù)、外周血白細(xì)胞數(shù)及脾臟淋巴細(xì)胞增殖情況來(lái)分析免疫效果,確定其使用劑量和使用時(shí)間。結(jié)果:1.定期保藏與移接的各豆類絲核菌菌株生長(zhǎng)狀態(tài)良好;從3.2871A豆類絲核菌菌株發(fā)酵液中提取分離到白色粉末,經(jīng)薄層色譜、氣相色譜鑒定分析確定其中含有苦馬豆素。2.發(fā)酵液4個(gè)部分提取物均呈現(xiàn)不同程度的抑菌效果。豆類絲核菌發(fā)酵液正丁醇萃取部分抑菌作用明顯,雷氏鹽提取物也具有較好的抑菌效果,由于SW標(biāo)準(zhǔn)液濃度太小沒(méi)能表現(xiàn)出明顯的抑菌效果。經(jīng)進(jìn)一步試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)正丁醇萃取部分對(duì)大腸埃希菌MIC為50mg/mL,對(duì)金黃色葡

4、萄球菌、李斯特桿菌MIC均25mg/mL,對(duì)其他2種菌MIC均為12.5mg/mL;雷氏鹽提取物對(duì)無(wú)乳鏈球菌、蠟狀芽孢桿菌MIC均為50mg/mL,對(duì)其他3種菌MIC均為25mg/mL。3.雛雞免疫新城疫疫苗前后3天,注射中劑量豆類絲核菌發(fā)酵液,作佐劑,可使雛雞血清特異性抗體效價(jià)極顯著增高(P<0.01),外周血白細(xì)胞數(shù)增加(P<0.01),雛雞免疫器官指數(shù)差異極顯著(P<0.01);中劑量豆類絲核菌發(fā)酵液?jiǎn)为?dú)或協(xié)同刺激淋巴細(xì)胞時(shí),淋巴細(xì)胞增殖極顯著(P<0.01)。結(jié)論:改進(jìn)從3.2871A豆類絲核菌菌株發(fā)酵液中提取分離苦馬豆素的方法,經(jīng)薄層色譜、氣相色譜鑒定

5、分析確定其產(chǎn)物中含有苦馬豆素,但未得到純品SW,試驗(yàn)方法仍需進(jìn)一步的研究與改進(jìn);發(fā)酵液4個(gè)部分提取物均呈現(xiàn)不同程度的抑菌效果,豆類絲核菌發(fā)酵液正丁醇萃取部分抑菌作用最明顯,說(shuō)明SW具有一定的抑菌作用;一定劑量的豆類絲核菌發(fā)酵液能增強(qiáng)雛雞的免疫功能?!居⑽恼?ImprovethemethodofisolateSWfromRhizoctonialeguminicolafermentationbroth;Studythebacteriostasisinvitrooffermentationbrothextractfromdifferentpolarsolvent,

6、widentheusescopeofRhizoctonialeguminicolafermentationbroth,improveitsutilizationvalue;Studytheeffecttochicken’simmunologicfunctionof3.2871ARhizoctonialeguminicolafermentationbroth。Method:1.Usethepotatodextroseagar(PDA)topreserveregularlyandgrafttheRhizoctonialeguminicola,fermentedcul

7、tureusetheimprovedCzapek’smedium,temperature25℃,Thermostateculture14d,collectthefermentationbrothandpretreat.UsethemethodofReducedpressureconcentration、stageextraction、D101macroporousresinadsorption、Silicagelcolumnchromatography、freezedrying、Decompressionsublimationetc.toisolateSWfro

8、mfermentatio

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