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1、鴨坦布蘇病毒E蛋白基因的原核表達(dá)收稿日期：2012-02-23基金項(xiàng)目：公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)(201003012)；國家國際科技合作項(xiàng)目（2010DFB33920）；中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金項(xiàng)目（2010JB04）作者簡介：姬希文，女，碩士研究生，預(yù)防獸醫(yī)學(xué)專業(yè)通信作者：李澤君，E-mail：lizejun@shvri.ac.cn姬希文1,2，李雪松1，邊延峰3，李國新1，顏丕熙1，張七斤2，李澤君1(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，上海200241；2.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)
2、大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，呼和浩特010018；3.天津生機(jī)集團(tuán)股份有限公司，天津300384）摘要：本研究利用RT-PCR方法擴(kuò)增鴨坦布蘇病毒（DuckTembusuvirus，DTMUV）奉賢株（FX2010）的結(jié)構(gòu)蛋白E基因，并將其克隆至原核表達(dá)載體pET32a（+），構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET32a-E。將其轉(zhuǎn)化受體菌E.coliBL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)進(jìn)行表達(dá)。SDS-PAGE和Westernblot試驗(yàn)檢測結(jié)果表明，E基因在大腸桿菌中得到了表達(dá)，并且可與抗DTMUV的多克隆抗體發(fā)生特異性反應(yīng)。E基因的成
3、功表達(dá)為DTMUV的診斷試劑盒、疫苗等的研制奠定基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：鴨坦布蘇病毒；E基因；克?。槐磉_(dá)中圖分類號：文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：1674-6422（2012）02-0000-00EXPRESSIONOFEPROTEINOFDUCKTEMBUSUVIRUSINPROKARYOTICCELLSJIXi-wen1,2，LIXue-song1，BIANYan-feng3，LIGuo-xin1，YANPi-xi1，ZHANGQi-jin2，LIZe-jun1（1.ShanghaiVeterinaryResearchInstit
4、ute,CAAS,Shanghai200241,China;2.CollegeofVeterinaryMedicine,InnerMongoliaAgriculturalUniversity,Hohhot010018,China;3.TianjinShengjiGroupCo.,Ltd.,Tianjin300384,China）Abstract:TheEgeneofduckTembusuvirus(DTMUV)wasamplifiedbyRT-PCRandinsertedintothemultipleclonesite
5、softhepET32a(+)vector.TherecombinantplasmidwastransformedintoBL21(DE3)competentcellsandthecellswereinducedwithIPTGtoexpresstheEprotein.SDS-PAGEandWesternBlotassaysshowedthatheEproteinwassuccessfullyexpressedandkepttheactivityforbindingtheDTMUV-specificantibody.B
6、asedonEproteinexpressedinprokaryoticcells,itmightbecomeeasytodevelopdiagnosiskitsandvaccinesforDTMUV.Keywords:Ducktembusuvirus;Egene;cloning;expression自2010年春季以來，中國華東地區(qū)發(fā)生了以產(chǎn)蛋下降和死亡為主要特征的鴨病的流行，之后該病迅速傳播全國多個省市，到目前為止，全國大部分主要水禽養(yǎng)殖地區(qū)仍然受到該病的威脅，發(fā)病率高達(dá)100%，病死率在5%~10%之間。經(jīng)過病毒
7、分離鑒定，目前已經(jīng)確定引起該病的病原為鴨坦布蘇病毒（Ducktembusuvirus,DTMUV）[1]。DTMUV屬黃病毒科黃病毒屬[2]，呈球型，直徑30～50nm，核心含單股RNA，有衣殼。從序列上分析，該病毒可能與其他黃病毒屬的病毒一樣，具有3結(jié)構(gòu)蛋白，即E蛋白、核蛋白和白蛋白為糖蛋白。其中，E蛋白是誘發(fā)動物機(jī)體產(chǎn)生抗日本乙腦病毒中和抗體的重要抗原[3]，黃病毒屬中多數(shù)病毒的E蛋白與機(jī)體宿主的免疫應(yīng)答作用密切相關(guān)，能刺激機(jī)體產(chǎn)生中和抗體和血凝抑制抗體[4,5]，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生持久T記憶細(xì)胞，引起保護(hù)性免疫反應(yīng)。E
8、蛋白在病毒致病過程中也起關(guān)鍵性作用，該蛋白上一些關(guān)鍵的氨基酸的替代即可引起神經(jīng)毒力和侵襲力的喪失[3]。此外，E基因還與病毒吸附、侵入宿主細(xì)胞有關(guān)。本研究首次表達(dá)和純化了具有生物學(xué)活性的DTMUVE蛋白，為DTMUV早期診斷試劑盒、疫苗與E蛋白結(jié)構(gòu)功能研究奠定了基礎(chǔ)。1材料和方法1.1質(zhì)粒、菌種及試劑pET32a（+）表達(dá)載體和J
