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1、大鼠載脂蛋白A1(Apo-A1)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)廈門慧嘉生物科技有限公司本試劑盒僅供研究使用檢測(cè)范圍：1.56μg/ml-100μg/ml最低檢測(cè)限：0.39μg/ml特異性：本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)天然或重組的大鼠Apo-A1，且與其他相關(guān)蛋白無(wú)交叉反應(yīng)。有效期：6個(gè)月預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測(cè)定大鼠血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中Apo-A1含量。說(shuō)明1．試劑盒保存：-20℃（較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí)）；2-8℃（頻繁使用時(shí)）。2．濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。3．中、英文說(shuō)明書(shū)可
2、能會(huì)有不一致之處，請(qǐng)以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。4．剛開(kāi)啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。概述載脂蛋白A1(apoA1)是血漿高密度脂蛋白（HDL）中的主要多肽。apoA1基因的結(jié)構(gòu)和功能令人感興趣是因?yàn)樵贖DL水平和冠心病間顯示的負(fù)相關(guān)性。267個(gè)氨基酸的前體最初經(jīng)過(guò)細(xì)胞內(nèi)與翻譯同時(shí)進(jìn)行的蛋白水解酶的切割成為前apoA-I。前apoA-I從細(xì)胞中分泌，在胸導(dǎo)管淋巴中以apoA-I1亞型被分離。apoA1存在于血漿，經(jīng)歷翻譯后蛋白酶水解加工成熟為血漿apoA-I。實(shí)驗(yàn)原理用純化的抗體
3、包被微孔板，制成固相載體，往包被抗Apo-A1抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗Apo-A1抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Apo-A1呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。試劑盒組成及試劑配制1.酶聯(lián)板(Assayplate)：一塊（96孔）。2.標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶(凍干品)。3.樣品稀釋液(SampleDiluent)：1×20ml/瓶。4.
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibodyDiluent）：1×10ml/瓶。5.辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液?（HRP-avidinDiluent）：1×10ml/瓶。6.生物素標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMBSubstrate）：1×10ml/瓶。9.濃洗滌液（WashBuffer）：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。10.終止液（StopS
5、olution）：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。需要而未提供的試劑和器材1.標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀1.高速離心機(jī)2.電熱恒溫培養(yǎng)箱3.干凈的試管和Eppendof管4.系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，最好用多通道移液器6.蒸餾水，容量瓶等標(biāo)本的采集及保存1.血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃
6、或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注：標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。標(biāo)本的稀釋原則：首先通過(guò)文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過(guò)程中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。最后計(jì)算濃度時(shí)，稀釋了“N”倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘
7、以上，然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為100μg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋100μg/ml，50μg/ml，25μg/ml，12.5μg/ml，6.25μg/ml，3.12μg/ml，1.56μg/ml，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0μg/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。如配制50μg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml（不要少于0.5ml）100μg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。生物素標(biāo)記抗體的稀釋原則：臨用前以生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)
8、算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100μl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標(biāo)記抗體加990μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100μl），實(shí)
