培養(yǎng)基配制及滅菌

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1、廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院實(shí)訓(xùn)教學(xué)教案（2010～2011學(xué)年第一學(xué)期）課程名稱(chēng)食品微生物檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)訓(xùn)項(xiàng)目培養(yǎng)基的配制與滅菌技術(shù)課時(shí)2教學(xué)對(duì)象10食品安監(jiān)1-4授課日期12月3日教材王瑞蘭主編《食品微生物檢驗(yàn)技能實(shí)訓(xùn)教程》，本院自編（2010年8月）教師姓名王瑞蘭教學(xué)方法演示法、練習(xí)法實(shí)訓(xùn)形式2人一組實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)中心簽字實(shí)訓(xùn)目的1、了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制的基本程序。2、熟悉分離、培養(yǎng)微生物前的有關(guān)準(zhǔn)備工作及操作方法。3、熟悉玻璃器皿的包扎方法。4、了解高壓蒸氣滅菌的原理與方法。教學(xué)內(nèi)容與要求內(nèi)容：1、固體、液體培養(yǎng)基的配制2、玻璃器皿的包扎方法要求：1、了解培養(yǎng)

2、基的配制原理和方法，掌握其配制的基本程序2、熟悉玻璃器皿的包扎方法3、了解高壓蒸氣滅菌的原理重點(diǎn)難點(diǎn)培養(yǎng)基的配制的基本程序儀器天平、稱(chēng)量紙、玻璃紙、藥匙、精密pH試紙、量筒、試管、錐瓶、玻璃棒、燒杯、培養(yǎng)皿、1ml吸量管、涂布棒、試管架、鐵絲筐、棉花、線繩、報(bào)紙、滅菌鍋等。試劑蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉、瓊脂、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、1mol/LNaOH溶液、1mol/LHCl溶液。5教學(xué)過(guò)程設(shè)計(jì)教學(xué)過(guò)程設(shè)計(jì)[板書(shū)]一、實(shí)訓(xùn)目的1、了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制的基本程序。2、熟悉分離、培養(yǎng)微生物前的有關(guān)準(zhǔn)備工作及操作方法。3、熟悉玻璃器皿的包扎方法。4、了解高壓蒸氣滅菌

3、的原理與方法。[板書(shū)]二、實(shí)訓(xùn)原理（一）培養(yǎng)基的配制1、培養(yǎng)基：是人工配制的適合于不同微生物生長(zhǎng)繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。它是微生物接種、分離培養(yǎng)的基礎(chǔ)。2、培養(yǎng)基的配制原則：①適宜的營(yíng)養(yǎng)成分；②適宜的pH值；③適宜的滲透壓；④合適的物理狀態(tài)3、培養(yǎng)基的分類(lèi)按物理狀態(tài)：液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。（二）高壓蒸氣滅菌利用加熱一個(gè)密閉的加壓滅菌鍋，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸氣。由于蒸氣不能溢出，而增加了滅菌鍋內(nèi)的壓力，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100℃的溫度。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。一般培養(yǎng)基用0.1Mpa，121.5℃，15～30min[

4、板書(shū)]三、實(shí)訓(xùn)步驟（2人一組）（一）培養(yǎng)基配制基本程序原料稱(chēng)量→溶解→調(diào)pH值→加瓊脂熔化，補(bǔ)水（固體培養(yǎng)基用）→過(guò)濾（可以省去）→分裝→加塞包扎、做標(biāo)記→滅菌→擺斜面或倒平板1.稱(chēng)量藥品根據(jù)培養(yǎng)基配方依次準(zhǔn)確稱(chēng)取各種藥品，放入適當(dāng)大小的燒杯中，瓊脂不要加入。蛋白胨極易吸潮，故稱(chēng)量時(shí)要迅速。2.溶解用量筒取一定量(約占總量的1/2)蒸餾水倒入燒杯中（做標(biāo)記），在電熱套中小火加熱，并用玻棒攪拌，以防液體溢出。待各種藥品完全溶解后，停止加熱，補(bǔ)足水分。53.調(diào)節(jié)pH根據(jù)培養(yǎng)基對(duì)pH的要求，用1mol/LNaOH或1mol/LHC1溶液調(diào)至所需pH。測(cè)定pH可用pH試紙4.

5、溶化瓊脂固體培養(yǎng)基須加入一定量瓊脂。瓊脂和剩余水量加入后（做水的刻度標(biāo)記），置電熱套中一面攪拌一面加熱煮沸，直至瓊脂完全融化后才能停止攪拌，并補(bǔ)足水分(水需預(yù)熱)。注意控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦。5.過(guò)濾分裝先將過(guò)濾裝置安裝好。如果是液體培養(yǎng)基，玻璃漏斗中放一層濾紙，如果是固體或半固體培養(yǎng)基，則需在漏斗中放多層紗布，或兩層紗布夾一層薄薄的脫脂棉趁熱進(jìn)行過(guò)濾。過(guò)濾后立即進(jìn)行分裝。分裝時(shí)注意不要使培養(yǎng)基沾染在管口或瓶口，以免浸濕棉塞，引起污染。液體分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。固體分裝裝量為管高的1/5，半固體分裝試管一般以試管高度的1/3為宜；分裝三角瓶，其裝

6、量以不超過(guò)三角瓶容積的一半為宜。6.包扎標(biāo)記培養(yǎng)基分裝后加好棉塞，再包上一層防潮紙，用棉繩系好。在包裝紙上標(biāo)明培養(yǎng)基名稱(chēng)，制備班級(jí)、組別和日期等。（二）培養(yǎng)基的配方及本次實(shí)驗(yàn)的需要量1、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（培養(yǎng)細(xì)菌）每組配制50ml，直接稱(chēng)取營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基18g水1000ml1）計(jì)算與稱(chēng)量：根據(jù)需求計(jì)算各成分的量，并準(zhǔn)確稱(chēng)量2）配制：直接稱(chēng)取營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基0.9g,，加熱溶解于50ml?蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH值至7.0～7.2。分裝兩支試管，15-20ml/支，加棉塞、包扎，?121℃高壓滅菌?15min備用。2、營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂培養(yǎng)基（細(xì)菌的分離培養(yǎng)，觀察菌落）每組配制180m

7、l牛肉3g(0.6g)蛋白胨10g(1.8g)NaCl5g(0.9g)瓊脂15～20g(3.2g)蒸餾水1000ml(180ml)1）計(jì)算與稱(chēng)量：根據(jù)需求計(jì)算各成分的量，并準(zhǔn)確稱(chēng)量2）配制：將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內(nèi)，然后用51mol/L的氫氧化鈉或者1mol/L的鹽酸，校正pH至7.2～7.4。再加入瓊脂，加熱煮沸，使瓊脂溶化，補(bǔ)水定容。分裝4支試管和2個(gè)錐瓶，試管裝量為10ml/支，錐瓶裝量為55ml/瓶，加棉塞、包扎，?121℃高壓蒸氣滅菌15min?！　。ㄈ┓蛛x培養(yǎng)微生物常用器皿的準(zhǔn)備1、玻璃儀器的清洗：培養(yǎng)皿6套，1ml吸量管2支