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《綿羊ⅱ型膠原colⅱ酶聯(lián)免疫分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、綿羊Ⅱ型膠原(ColⅡ)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：96T0.3μg/L–8.0μg/L使用目的：本試劑盒用于測定綿羊血清、血漿及相關液體樣本中Ⅱ型膠原(ColⅡ)含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中綿羊Ⅱ型膠原(ColⅡ)水平。用純化的綿羊Ⅱ型膠原(ColⅡ)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入Ⅱ型膠原(ColⅡ)，再與HRP標記的Ⅱ型膠原(ColⅡ)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，
2、并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Ⅱ型膠原(ColⅡ)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中綿羊Ⅱ型膠原(ColⅡ)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶6ml×1瓶12孔×8條6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1/瓶789終止液6ml×1瓶0.5ml×1瓶1.5ml×1瓶1份2酶標試劑標準品（16μg/L）標準品稀釋液3酶標包被板4樣品稀釋液5顯色劑A液6顯色劑B液10說明書11封板膜12密封袋2張1個標本要求1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行
3、，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。8.0μg/L4.0μg/L2.0μg/L1.0μg/L0.5μg/L5號標準品4號標準品3號標準品2號標準品1號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液150μl的
4、3號標準品加入150μl標準品稀釋液150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，
然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.4.5.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后
5、棄去，如此重復5次，拍干。6.7.8.9.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。溫育：操作同3。洗滌：操作同5。顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。操作程序總結：計算以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用
6、標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度。注意事項1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本
7、OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物請避光保存。7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9．本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。保存條件及有效期1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個月
