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1、CyclinE蛋白在食管鱗狀細胞癌組織中的表達及意義作者：張金添，黃漢興，吳永廉【摘要】目的觀察CyclinE在食管鱗狀細胞癌和癌周正常食管組織的表達，從量化角度闡明其在食管鱗狀細胞癌組織中表達的病理學意義。方法常規(guī)石蠟包埋、HE切片確診，免疫組化MaxVision法檢測CyclinE在食管鱗狀細胞癌和癌周正常食管組織的定位和表達，Image-proplus圖像分析軟件對其表達強度進行定量分析，并用表達的陽性單位(positiveunit，PU)反映其表達強度。結(jié)果CyclinE蛋白在食管鱗狀細胞癌和癌周正常食管組織中的表
2、達主要定位在細胞核。食管鱗狀細胞癌表達的PU值高于癌周正常食管組織(P<0.01)，CyclinE蛋白表達的PU值與食管癌分化程度有關(guān)(P<0.01)，低分化鱗狀細胞癌表達的PU值高于高分化及中分化鱗狀細胞癌。CyclinE蛋白表達的PU值與食管癌患者的性別、年齡、轉(zhuǎn)移和TNM分期未見明顯相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論CyclinE蛋白表達程度與食管鱗狀細胞癌及分化程度具有相關(guān)性，可能成為判斷其指標之一。【關(guān)鍵詞】食管癌;CyclinE;免疫組化;定量分析9細胞周期蛋白E(CyclinE)在多種腫瘤中有基因
3、過表達，對腫瘤的發(fā)生發(fā)展起重要作用，已被證實是一種癌基因[1-2]。本研究擬通過原位定量檢測CyclinE蛋白的表達，從量化角度揭示其在食管鱗狀細胞癌中的表達特點，闡明其與食管鱗狀細胞癌分化程度、轉(zhuǎn)移和分期的關(guān)系，探索其在食管鱗狀細胞癌中表達的意義?！ ?材料和方法 1.1材料及分組收集福建省莆田市第一醫(yī)院病理科資料完整的原發(fā)性食管鱗狀細胞癌手術(shù)切除標本(術(shù)前未經(jīng)治療)54例，其中男37例，女17例，年齡最小43歲，最大80歲，平均61歲;高分化19例，中分化22例，低分化13例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者26例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者28例
4、;TNM分期Ⅰ期6例，Ⅱ期29例，Ⅲ期19例。同時取20例癌周正常食管組織(距腫物5cm以上)做為正常對照。所有標本經(jīng)10%福爾馬林固定、常規(guī)石蠟包埋、切片(厚度4μm)、HE染色?！ ?.2免疫組織化學染色免疫組化采用MaxVision法。一抗為鼠抗人CyclinE單克隆抗體(即用型)、MaxVision試劑盒及DAB顯色試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。主要步驟如下：石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，1mmol·9L-1、pH6.0檸檬酸高壓修復(fù)抗原1.5min，3%H2O2室溫孵育10min，以清除內(nèi)源性過氧化物酶活性，滴加一
5、抗室溫孵育60min;滴加二抗室溫孵育15min，DAB顯色5min;不復(fù)染(用于圖像定量分析)，脫水、透明、封固。每批免疫組化染色均設(shè)立陽性和陰性對照，用已知陽性切片作為陽性對照，用PBS緩沖液替代一抗作為陰性對照?！ ?.3顯微圖像定量分析根據(jù)陰性和陽性對照的顯色情況，在確定無假陽性和假陰性的前提下，以細胞核染成淺黃色、棕黃色或棕褐色為陽性。用Image-proplus圖像分析系統(tǒng)，在40倍物鏡下，每例樣本隨機選取10個視野，共測試200個陽性細胞，用交互式測試方法測試每個陽性細胞的灰度值為Gβ，同時在相應(yīng)的切片中測試
6、背景灰度值Gα，按下式計算每個陽性細胞的陽性單位值,本圖像分析系統(tǒng)中的Gmax為256，取每個樣本中200個陽性細胞值的均值作為此樣本表達的陽性單位值(PositiveUnit,PU)。PU值越大，表達強度越高;反之，表達強度越低?！ U=
7、Gα-Gβ
8、Gmax×100 1.4統(tǒng)計學方法用SPSS11.0統(tǒng)計分析軟件進行數(shù)據(jù)處理,采用兩樣本t檢驗和方差分析，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。 2結(jié)果 CyclinE染色主要在細胞核內(nèi)，染色呈淺黃色、棕黃色、棕褐色為陽性細胞(圖1，見封3)。9 2.1Cyc
9、linE在食管鱗狀細胞癌和正常食管黏膜上皮細胞核中的表達食管鱗狀細胞癌和正常食管細胞的CyclinE蛋白表達程度不同(8.37±3.86PU,3.29±2.03PU)，二者差異有統(tǒng)計學意義(t=7.317，P<0.01)?！ ?.2CyclinE在不同分化程度食管鱗狀細胞癌癌細胞核中的表達 CyclinE蛋白在不同分化程度的食管鱗狀細胞癌呈陽性表達，但其表達程度不同，CyclinE蛋白表達的PU值在高分化、中分化和低分化食管鱗狀細胞癌間總體比較的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，其中高分化食管鱗狀細胞癌組及中
10、分化食管鱗狀細胞癌組CyclinE蛋白表達的PU值顯著低于低分化食管鱗狀細胞癌組(P<0.05)，見表1。表1CyclinE在不同分化程度食管鱗狀細胞癌細胞中的表達組別nPU值(±s) 2.3CyclinE蛋白表達與食管癌患者性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期的關(guān)系 CyclinE蛋白表達的P
