hif1α和survivin在胃癌組織中的表達(dá)及與血管生成的關(guān)系

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1、HIF1α和survivin在胃癌組織中的表達(dá)及與血管生成的關(guān)系【摘要】目的:探討缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF1α)和凋亡抑制蛋白survivin在胃癌發(fā)展過(guò)程中的意義及其對(duì)腫瘤血管生成的影響.方法:應(yīng)用組織芯片技術(shù)和免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)HIF1α和survivin在70例胃癌組織、14例癌旁組織和15例正常組織中的表達(dá),并計(jì)數(shù)CD105標(biāo)記癌組織的微血管密度（MVD）.結(jié)果:HIF1α和survivin在胃癌組織中的表達(dá)明顯高于正常組織及癌旁組織（P＜0.05）；HIF1α和survivin的表達(dá)

2、均與胃癌的浸潤(rùn)深度、臨床分期及局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間存在相關(guān)性（P<0.05）；HIF1α和survivin表達(dá)陽(yáng)性組的MVD均高于各自的陰性組（P<0.05）；HIF1α和survivin在胃癌中表達(dá)存在正相關(guān)性（r=0.285,P<0.05）.結(jié)論：HIF1α和survivin在胃癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中具有重要意義；聯(lián)合檢測(cè)兩者的表達(dá)可用于評(píng)價(jià)胃癌的惡性生物學(xué)行為.【關(guān)鍵詞】胃腫瘤缺氧誘導(dǎo)因子1αsurvivinCD105　　0引言　　多數(shù)腫瘤的生長(zhǎng)具有缺氧的微環(huán)境,腫瘤形成的關(guān)鍵步

3、驟就是對(duì)缺氧的適應(yīng),缺氧誘導(dǎo)因子1α（hypoxiainduciblefactor1alpha，HIF1α）是細(xì)胞適應(yīng)缺氧而產(chǎn)生的一種核轉(zhuǎn)錄因子.9在多種惡性腫瘤如腸癌、乳腺癌、肺癌等組織中，HIF1α均有過(guò)度表達(dá)并參與腫瘤血管形成［1］.CD105是一種新型的血管內(nèi)皮標(biāo)記物,參與血管生成,在標(biāo)記腫瘤相關(guān)的新生血管內(nèi)皮上具有更高的特異性［2］.本實(shí)驗(yàn)對(duì)70例胃癌、14例癌旁組織、15例正常組織中的HIF1α、凋亡抑制基因及CD105標(biāo)記的癌組織的微血管密度（MVD）進(jìn)行了檢測(cè)，旨在探討胃癌發(fā)生發(fā)展

4、過(guò)程中因缺氧而造成的HIF1α的表達(dá)以及其對(duì)腫瘤血管形成的影響，為臨床治療新靶點(diǎn)提供依據(jù).　　1材料和方法　　1．1材料蘭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2003/2005外科手術(shù)切除胃腺癌石蠟包埋標(biāo)本70（男39,女31）例,年齡26～74（平均55.6）歲.其中高分化21例，中分化30例，低分化19例.浸潤(rùn)程度:粘膜層18例，肌層33例,達(dá)漿膜層19例.淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例，未轉(zhuǎn)移的39例.另取該組胃腺癌病例中腫瘤手術(shù)切除標(biāo)本切緣處正常胃粘膜(病理證實(shí))石蠟包埋標(biāo)本15例及癌旁粘膜14例作為對(duì)照.濃縮型兔抗人HIF1

5、α多克隆抗體購(gòu)自美國(guó)SantaCruz公司,工作濃度為1∶150；即用型survivin和CD105鼠抗人單克隆抗體及SP試劑盒均購(gòu)自北京中杉公司.　　1.2方法9　　1.2.1染色方法已知陽(yáng)性切片做陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替一抗作空白對(duì)照.福爾馬林固定胃腺癌標(biāo)本，石蠟切片58℃烤4h，常規(guī)脫蠟至水，抗原修復(fù)（98℃）20min，PBS洗3×3min.3mL/LH2O2抑制內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫20min，PBS洗3×3min，滴加二抗正常血清，室溫孵育10min，不洗切片分別滴加濃縮型兔抗人HIF1α多克隆

6、抗體(1∶150）、即用型survivin和CD105鼠抗人單克隆抗體于溫盒內(nèi)37℃,1h，PBS洗3×3min，滴加二抗，溫盒內(nèi)37℃，10min，PBS洗3×3min，DAB顯色8～10min，自來(lái)水終止反應(yīng)，蘇木精襯染60s，水洗藍(lán)化，常規(guī)脫水樹(shù)膠封片.　　1.2.2結(jié)果判斷HIF1α，survivin陽(yáng)性染色為淡黃色、棕黃色或棕褐色，采用二級(jí)計(jì)分法，即以染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞的百分比的乘積做為半定量標(biāo)準(zhǔn)：染色強(qiáng)度：0分為無(wú)色；1分為黃色；2分為棕黃色；3分為棕褐色（深淺與背景色相對(duì)比）.陽(yáng)性細(xì)胞所占的

7、百分比：陽(yáng)性細(xì)胞≤10%為1分；10%～50%為2分；51%～75%為3分；>75%為4分.染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比的乘積0～3分為陰性（-）；>3分為免疫反應(yīng)陽(yáng)性（+）［3］.　　1.2.3MVD計(jì)數(shù)以CD105為血管標(biāo)記物的MVD計(jì)數(shù)參照Weidner等［4］的標(biāo)準(zhǔn),略改動(dòng).在低倍鏡下(100×)尋找整張切片中富含血管組織的“熱點(diǎn)”(hotspot)區(qū),即棕黃染色密度最高的區(qū)域.在高倍鏡下(400×)計(jì)數(shù)其內(nèi)的血管數(shù)目,每張切片上分別選擇39個(gè)不同高倍視野計(jì)數(shù),結(jié)果取其平均值.　　統(tǒng)計(jì)

8、學(xué)處理:應(yīng)用SPSS11.0版本統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析.兩樣本均數(shù)比較行t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)，以P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.　　2結(jié)果　　2.1HIF1α和survivin的表達(dá)HIF1α和survivin染色的陽(yáng)性細(xì)胞在組織中呈彌漫和(或)散在分布，HIF1α著色部位主要在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì).survivin定位于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì).15例正常組織中HIF1α和survivin均無(wú)表