嚴(yán)重?zé)齻笫箅x體肺泡巨噬細(xì)胞cd14表達(dá)調(diào)控的實(shí)驗(yàn)研究

《嚴(yán)重?zé)齻笫箅x體肺泡巨噬細(xì)胞cd14表達(dá)調(diào)控的實(shí)驗(yàn)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、嚴(yán)重?zé)齻笫箅x體肺泡巨噬細(xì)胞CD14表達(dá)調(diào)控的實(shí)驗(yàn)研究作者：李友良郇京寧陳玉林夏照帆王光毅郭云賈氫【摘要】　　目的探討嚴(yán)重?zé)齻麑?duì)體外培養(yǎng)大鼠肺泡巨噬細(xì)胞(AM)CD14膜蛋白(CD14)和mRNA基因表達(dá)變化的影響，以及抗CD14抗體對(duì)AM產(chǎn)生腫瘤壞死因子α(TNFα)和白細(xì)胞介素6(IL6)的調(diào)控作用。方法(1)成年SD大鼠84只，分為燒傷組和內(nèi)毒素(LPS)組(每組42只)，每組均分為1，2，4，6，8，10和12h共7個(gè)時(shí)相點(diǎn)，并設(shè)對(duì)應(yīng)的對(duì)照組(各6只大鼠)。大鼠燒傷和LPS注射后檢測(cè)外周

2、血LPS濃度。(2)成年SD大鼠168只，分為燒傷血清組、血清抗體組、LPS組、LPS抗體組(每組42只)，每組均分為1，2，4，6，8，10和12h共7個(gè)時(shí)相點(diǎn)，并設(shè)對(duì)應(yīng)的對(duì)照組(各6只大鼠);各組大鼠行全肺在體支氣管肺泡灌洗分離AM，并按時(shí)相點(diǎn)分別進(jìn)行體外培養(yǎng)。以上4組分別加入燒傷血清、燒傷血清+抗體、LPS、LPS+抗體，在以上相同時(shí)相點(diǎn)終止培養(yǎng)，RTPCR、免疫組織化學(xué)及ELISA方法分別檢測(cè)4組AM在各時(shí)相點(diǎn)CD14mRNA表達(dá)、蛋白表達(dá)及分泌TNFα和IL6的變化。結(jié)果(1)燒傷組與

3、燒傷對(duì)照組、LPS組與LPS對(duì)照組比較發(fā)現(xiàn)，燒傷及LPS注射后大鼠各時(shí)相點(diǎn)外周血LPS濃度均明顯高于對(duì)照組。(2)燒傷血清組、LPS組與對(duì)應(yīng)的對(duì)照組比較發(fā)現(xiàn)，燒傷血清組、LPS組大鼠AM各時(shí)相點(diǎn)CD14mRNA表達(dá)、蛋白表達(dá)均明顯增高，AM培養(yǎng)上清中TNFα和IL6濃度亦相應(yīng)顯著增高(P<0.01)。以燒傷血清與AM培養(yǎng)110h后，燒傷血清組培養(yǎng)上清中TNFα和IL6濃度即顯著增加。與燒傷血清組比較，血清抗體組AM在各時(shí)相點(diǎn)CD14mRNA表達(dá)、蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.01)，T

4、NFα和IL6濃度亦顯著降低(P<0.01)。與LPS組比較，LPS抗體組AM在各時(shí)相點(diǎn)CD14mRNA表達(dá)、蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.01)，TNFα和IL6濃度亦顯著降低(P<0.01)。結(jié)論嚴(yán)重?zé)齻笸庵苎狶PS濃度增加，離體AMCD14mRNA表達(dá)和蛋白表達(dá)均顯著增加，使LPS對(duì)免疫系統(tǒng)的激活作用顯著增大;AM分泌TNFα和IL6明顯增加，而抗CD14抗體可以明顯拮抗AM合成和分泌炎性介質(zhì)。提示嚴(yán)重?zé)齻笸ㄟ^(guò)調(diào)節(jié)CD14的作用而減少炎性介質(zhì)的合成和分泌是可行的?！?/p>

5、關(guān)鍵詞】巨噬細(xì)胞肺泡白細(xì)胞介素6腫瘤壞死因子α抗原CD14燒傷大鼠Wistar疾病模型動(dòng)物　　嚴(yán)重?zé)齻蟠罅磕[瘤壞死因子α(TNFα)和白細(xì)胞介素6(IL6)等前炎性細(xì)胞因子釋放，導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)的發(fā)生。單核巨噬細(xì)胞在此過(guò)程中起關(guān)鍵作用，它不僅是大量細(xì)胞因子的來(lái)源，也可能是后續(xù)炎癥反應(yīng)放大的啟動(dòng)因素，但其中的機(jī)制尚有較多不明之處。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察內(nèi)毒素(LPS)受體CD14在燒傷大鼠肺泡巨噬細(xì)胞(AM)產(chǎn)生TNFα和IL6中的作用及CD14抗體的阻斷作用，探討LPS信號(hào)傳導(dǎo)

6、通路對(duì)SIRS產(chǎn)生的影響，以及燒傷后抑制細(xì)胞因子過(guò)量分泌的可能途徑。10　　1材料和方法　　1.1燒傷模型及燒傷血清制備成年SD大鼠84只，體質(zhì)量200g左右[第二軍醫(yī)大學(xué)訓(xùn)練部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào):SYXK(軍)2000012]，隨機(jī)分為燒傷組和對(duì)照組(假燙組)，再于1，2，4，6，8,10和12h各時(shí)相點(diǎn)分為7組，每組大鼠6只。氣管穿刺注入植物血凝素0.4mL(100mg/mL)，3d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。燒傷組大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉(30mg/kg)麻醉，背部去毛，恒溫水燙儀(第二軍醫(yī)大學(xué)燒傷

7、科實(shí)驗(yàn)室研制)100℃燙10s，制成20%Ⅲ度燒傷模型(經(jīng)病理證實(shí));對(duì)照組大鼠以37℃水模擬燙傷過(guò)程。分別于傷后1,2,4,6,8,10,12h處死動(dòng)物，分離AM和外周血血清，每只動(dòng)物取血清0.5mL進(jìn)行LPS檢測(cè)，其余血清置于-70℃冰箱備用?！　?.2LPS檢測(cè)取上述分離血清，依合成基質(zhì)偶氮顯色法試劑盒(批號(hào)960702，上海醫(yī)學(xué)化驗(yàn)所)主要步驟進(jìn)行，反應(yīng)終產(chǎn)物在波長(zhǎng)545nm處比色測(cè)吸光度，依所測(cè)吸光度(D)值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上換算成LPS含量，每次檢測(cè)標(biāo)本分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?！　?.3AM的提取培養(yǎng)

8、大鼠處死后立即開胸，用PBS緩沖液行全肺在體支氣管肺泡灌洗(BAL)，灌洗液以860r/min4℃離心10min，棄上清，加含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，調(diào)整細(xì)胞濃度為10610mL-1，接種于24孔板，每孔2mL，置37℃、體積分?jǐn)?shù)為0.05的CO2溫箱孵育1h，PBS洗去未貼壁細(xì)胞，貼壁細(xì)胞主要為AM。取部分細(xì)胞樣品做細(xì)胞過(guò)氧化物酶純度和臺(tái)盼藍(lán)拒染活力鑒定，純度和活力均>95%。將上述部分細(xì)胞用于mRNA含量測(cè)定，部分進(jìn)行CD14蛋