中度液壓性創(chuàng)傷性腦損傷模型的建立與評(píng)估

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1、中度液壓性創(chuàng)傷性腦損傷模型的建立與評(píng)估作者：崔俊波，梁建偉，陳寶貴【摘要】目的制作中度液壓腦損傷動(dòng)物模型，并對(duì)模型進(jìn)行評(píng)估。方法雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、創(chuàng)傷3d組，創(chuàng)傷7d組。創(chuàng)傷組沖擊力大小為：(170±10)kPa,作用時(shí)間為(20±2)ms。結(jié)果損傷組75%動(dòng)物在創(chuàng)傷后立即出現(xiàn)大鼠反射消失、昏迷、四肢運(yùn)動(dòng)功能減弱，甚至去腦強(qiáng)直，且可出現(xiàn)呼吸暫停，并具有15%左右的死亡率。應(yīng)用NSS評(píng)價(jià)表明，創(chuàng)傷3d組創(chuàng)傷后1，3d評(píng)分分別為(14.77±1.17)和(13.38±0.65)，創(chuàng)傷7d組創(chuàng)傷后1，3，7d評(píng)分分別為：(14.62±0.65)，(13.15±0.69)，(14

2、.31±0.75)，與同期正常組比較，P<0.01。光鏡和電鏡觀察均表明正常組與創(chuàng)傷組之間差異明顯。結(jié)論液壓腦損傷裝置可以建立中度創(chuàng)傷性腦損傷動(dòng)物模型，且沖擊力定量準(zhǔn)確，制作的模型穩(wěn)定性和重復(fù)性良好，NSS在評(píng)估液壓性創(chuàng)傷性腦損傷模型上具有準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，值得進(jìn)一步推廣應(yīng)用?！娟P(guān)鍵詞】創(chuàng)傷性腦損傷;液壓腦損傷;動(dòng)物模型;NSS創(chuàng)傷性顱腦損傷(traumaticbraininjury9,TBI)是世界性的多發(fā)性疾病，也是死亡率和致殘率最高的疾病之一。其中中度TBI占有相當(dāng)大的比例。建立合適的顱腦損傷模型以研究TBI的機(jī)理對(duì)于臨床相當(dāng)重要。本文就應(yīng)用液壓腦損傷裝置制作中度腦損傷模型的方法

3、進(jìn)行研究并對(duì)模型進(jìn)行評(píng)估。　　1材料與方法　　1.1動(dòng)物來(lái)源及分組SPF級(jí)、雄性SD大鼠64只，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證編號(hào)：SCXK(京)2002-0003。體重(320±10)g，實(shí)驗(yàn)大鼠于動(dòng)物室內(nèi)分開(kāi)籠中喂養(yǎng)，室內(nèi)溫度為(17±3)℃，濕度為(50±20)%，每日光照12h，并提供約50g全營(yíng)養(yǎng)鼠糧及足量清潔飲水。應(yīng)用SPSS軟件將大鼠隨機(jī)分為4組：正常組和假手術(shù)組各14只，模型3d組、模型7d組各18只?！　≌＝M和假手術(shù)組于損傷后7d處死，模型組分3d、7d兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死動(dòng)物。　　1.2顱腦創(chuàng)傷模型的制作本研究所用液壓腦損傷裝置由天津市環(huán)湖醫(yī)院從美國(guó)弗吉尼亞州

4、立大學(xué)定制并提供使用?！　?.2.1手術(shù)步驟隨機(jī)挑選動(dòng)物，大體觀察無(wú)異常表現(xiàn)后，稱取體質(zhì)量并記錄。腹腔注射10%水合氯醛0.29ml/kg體重進(jìn)行全身麻醉，保持自主呼吸。俯臥位固定于動(dòng)物立體定位頭架，保持頂骨左右位水平、前后位切線水平。頂部備皮、消毒，做正中矢狀切口，長(zhǎng)約1.5cm，雙極電凝止血，鈍性剝離暴露顱骨，于左頂部矢狀縫旁開(kāi)2mm，冠狀縫后2.5mm，用臺(tái)式牙鉆行顱骨鉆孔，磨開(kāi)一直徑4mm的圓形骨窗，并注意保持硬腦膜完整，用骨蠟或無(wú)菌棉簽止血、沖洗潔凈備用。用水門(mén)汀將直徑5mm的打擊管與骨窗相互粘牢，粘合部位固化20min，達(dá)到水密且牢固的效果?！　?.2.2打擊過(guò)程與復(fù)蘇先將粘于顱

5、骨上的打擊管內(nèi)注滿37℃生理鹽水后，將動(dòng)物連接于液壓沖擊裝置，使打擊管與鼠頭矢狀面平行，與冠狀面平行呈垂直打擊。開(kāi)啟并調(diào)整數(shù)字示波記錄器、信號(hào)放大器進(jìn)入待命狀態(tài)后，調(diào)整擺錘、擺桿抓鉤至所需位置完成打擊前準(zhǔn)備，等動(dòng)物掐尾反射出現(xiàn)后進(jìn)行打擊。沖擊能量通過(guò)液壓連通器原理導(dǎo)入封閉的顱腔內(nèi)，造成腦創(chuàng)傷。裝置通過(guò)光電自動(dòng)控制完成對(duì)沖擊時(shí)程和強(qiáng)度的檢測(cè)與記錄，顯示于示波器并作記錄留分析。撤除粘合于動(dòng)物顱骨的打擊管，經(jīng)過(guò)必要的復(fù)蘇后再以骨蠟封閉打擊骨窗，縫合切口?！　_擊時(shí)程和強(qiáng)度于示波器分別以毫秒(ms)和毫伏特(mV)顯示，作用于大鼠腦部的作用力在示波器顯示為單峰，將代表強(qiáng)度的電壓(mV)顯示換算為壓強(qiáng)

6、(atm)的公式為：Y=X×0.0068，其中X代表實(shí)測(cè)顯示的mV大小，Y為所轉(zhuǎn)換后求得的壓強(qiáng)，0.00698為固定系數(shù)。并將壓強(qiáng)換算為kPa。經(jīng)多次前期預(yù)實(shí)驗(yàn)證明：調(diào)整打擊錘角度至12度，則產(chǎn)生的壓力大小(170±10)kPa，作用時(shí)間為(20±2)ms，即為本實(shí)驗(yàn)所需要的實(shí)驗(yàn)條件?！　〖偈中g(shù)組動(dòng)物麻醉后僅行顱骨鉆孔及固定打擊頭，不進(jìn)行液壓沖擊致傷，骨蠟封閉鉆孔后縫合切口。正常組不進(jìn)行任何損傷?！　?.3神經(jīng)行為學(xué)評(píng)價(jià)應(yīng)用NSS(neurologicalseverityscore)量表[1，2]對(duì)大鼠進(jìn)行神經(jīng)行為評(píng)價(jià)。正常大鼠神經(jīng)行為評(píng)價(jià)總分為19分。正常組和假手術(shù)組均于創(chuàng)傷后1d、3d、

7、7d評(píng)分。模型3d組于創(chuàng)傷后1d、3d評(píng)分;模型7d組于創(chuàng)傷后1d、3d、7d評(píng)分?！　?.4病理形態(tài)學(xué)觀察　　1.4.1光鏡觀察4組動(dòng)物每組各用4只動(dòng)物分別作光鏡觀察。各組動(dòng)物按時(shí)間要求再次麻醉后，迅速取損傷區(qū)腦組織浸入4%多聚甲醛內(nèi)4℃固定48h后，修成厚4mm塊，常規(guī)酒精脫水，石蠟包埋，行5μm冠狀切片，作HE染色，Olympus顯微鏡下觀察、照像?！　?.4.2電鏡觀察4組動(dòng)物每組各用3只動(dòng)物分別作電