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《亞洲牛帶絳蟲成蟲延伸因子-1基因的表達、純化及免疫學(xué)分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、亞洲牛帶絳蟲成蟲延伸因子-1基因的表達、純化及免疫學(xué)分析作者：申萍香，吳璇，黃江，胡旭初，余新炳，包懷恩，廖興江【摘要】目的對亞洲牛帶絳蟲成蟲延伸因子-1(elongationfactor1,EF-1)基因進行克隆、表達和免疫學(xué)初步研究。方法將亞洲牛帶絳蟲成蟲EF-1克隆到原核表達質(zhì)粒pET-28a(+)中，在大腸桿菌BL-21/DE3中用異丙硫代-β-D半乳糖苷誘導(dǎo)表達，表達產(chǎn)物通過十二烷基磺酸鈉－聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)進行鑒定，用鎳離子金屬螯合劑親和層析柱進行純化，用蛋白印跡法(Westernblotting)進行免疫學(xué)分析。結(jié)
2、果PCR、雙酶切及DNA測序結(jié)果均表明重組質(zhì)粒pET-28a(+)-EF-1構(gòu)建成功。重組蛋白可被感染了亞洲牛帶絳蟲患者血清和豬血清識別，表明其具有免疫反應(yīng)性。結(jié)論亞洲牛帶絳蟲成蟲EF-1基因可在原核表達系統(tǒng)中獲得具有免疫學(xué)活性的表達，為進一步研究該蛋白的功能奠定了基礎(chǔ)。【關(guān)鍵詞】亞洲牛帶絳蟲；延伸因子-1；基因克??；原核表達 ABSTRACT:ObjectiveTocloneandexpressthenovelgenenamedelongationfactor1(EF-1)ofTaeniasaginataasiaticainordertoana
3、lyzetheimmunogenicityoftherecombinantprotein.MethodsByscreeningthefulllengthcDNAplasmidlibrary,the11codingregionofEF-1wasamplifiedwithPCR,andclonedintotheprokaryoticexpressionvectorpET-28a(+)andthenexpressedinE.coliBL21withIPTGinduction.TherecombinantproteinwasdetectedbySDS-PA
4、GEandpurifiedbyNi-IDAaffinitychromatography,anditsimmunogenicitywasanalyzedbyWesternblotting.ResultsPCR,doubleenzymedigestionandDNAsequencingconfirmedthattherecombinantexpressionplasmidwassuccessfullyconstructed.WesternblotanalysisofEF-1recombinantproteintestifiedthattherecomb
5、inantproteincouldberecognizedbyimmunizingtheserumofswineandpatient,thereforeindicatingitsimmunogenicity.ConclusionAnovelgenecodingEF-1ofTaeniasaginataasiaticawasclonedandexpressedsuccessfully.ThepurifiedproteinofEF-1willbeofimportanceforfurtherresearchonthebiologicalfunctionof
6、thegene. KEYWORDS:Taeniasaginataasiatica;elongationfactor1(EF-1);molecularcloning;prokaryoticexpression 亞洲牛帶絳蟲(Taeniasaginata11asiatica)是近30年來發(fā)現(xiàn)的一種成蟲形態(tài)與牛帶絳蟲相似，而囊尾蚴卻與豬囊尾蚴相似并以豬作為中間宿主的人體帶絳蟲。2006年我們在前期研究的基礎(chǔ)上進一步系統(tǒng)地開展對亞洲牛帶絳蟲在分類地位、分子診斷和疫苗等方面的研究［1-4］，為制定預(yù)防人體帶絳蟲病策略提供依據(jù)。本研究從亞洲牛帶絳蟲成蟲cD
7、NA質(zhì)粒文庫中篩選出一個延伸因子-1(elongationfactor1,EF-1)的同源基因，構(gòu)建了pET-28a(+)-EF-1原核表達載體，并對其原核表達產(chǎn)物進行了初步的免疫學(xué)研究，為進一步研究其生物學(xué)功能奠定基礎(chǔ)?！ ?材料與方法 1.1材料 1.1.1血清來源 感染亞洲牛帶絳蟲豬血清由貴陽醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)教研室提供，患者血清采自亞洲牛帶絳蟲流行區(qū)貴州省都勻市米秀鄉(xiāng)，健康人血清由中山大學(xué)熱帶病重點實驗室提供?！ ?.1.2文庫、質(zhì)粒、菌株 蟲體標(biāo)本采自亞洲牛帶絳蟲流行區(qū)貴州省都勻市米秀鄉(xiāng)，亞洲牛帶絳蟲成蟲全長cDNA質(zhì)粒文庫的構(gòu)建、E
8、ST測序及Unigene11分析與上海聯(lián)合基因有限公司合作完成。原核表達質(zhì)粒pET-28a(+)和大腸桿菌BL-21/DE
